https://wiki.fkkt.uni-lj.si/index.php?title=Veri%C5%BEna_reakcija_s_polimerazo_%28PCR%29&feed=atom&action=historyVerižna reakcija s polimerazo (PCR) - Revision history2024-03-28T12:38:28ZRevision history for this page on the wikiMediaWiki 1.39.3https://wiki.fkkt.uni-lj.si/index.php?title=Veri%C5%BEna_reakcija_s_polimerazo_(PCR)&diff=5236&oldid=prevMargareta Žlajpah at 20:19, 11 January 20112011-01-11T20:19:13Z<p></p>
<table style="background-color: #fff; color: #202122;" data-mw="interface">
<col class="diff-marker" />
<col class="diff-content" />
<col class="diff-marker" />
<col class="diff-content" />
<tr class="diff-title" lang="en">
<td colspan="2" style="background-color: #fff; color: #202122; text-align: center;">← Older revision</td>
<td colspan="2" style="background-color: #fff; color: #202122; text-align: center;">Revision as of 20:19, 11 January 2011</td>
</tr><tr><td colspan="2" class="diff-lineno" id="mw-diff-left-l1">Line 1:</td>
<td colspan="2" class="diff-lineno">Line 1:</td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Raziskave na področju raziskovanja genomov organizmov ter projekt človeški genom so omogočile dostop do informacij zaporedja genov. Za takšno biokemijsko analizo potrebujemo večje količine sekvence genov, kar nam dandanes omogoča metoda [http://www.ucl.ac.uk/~ucbhjow/b200/images/91m-17376-pcr.gif PCR]. PCR ali verižna reakcija s polimerazo je proces, v katerem lahko pridobimo večje količine določenega zaporedja, ki lahko meri največ 6000 baznih parov. Odkril jo je Nobelov nagrajenec Kary Mullis leta 1983.</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Raziskave na področju raziskovanja genomov organizmov ter projekt človeški genom so omogočile dostop do informacij zaporedja genov. Za takšno biokemijsko analizo potrebujemo večje količine sekvence genov, kar nam dandanes omogoča metoda [http://www.ucl.ac.uk/~ucbhjow/b200/images/91m-17376-pcr.gif PCR]. PCR ali verižna reakcija s polimerazo je proces, v katerem lahko pridobimo večje količine določenega zaporedja, ki lahko meri največ 6000 baznih parov. Odkril jo je Nobelov nagrajenec Kary Mullis leta 1983.</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker" data-marker="−"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #ffe49c; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>PCR je tako uporabna, ker lahko tri stopnje – denaturacijo, hibridizacijo in sintezo DNA – večkrat ponovimo s preprostim spreminjanjem temperature reakcijske mešanice. Vsaka na novo sintetizirana veriga DNA lahko služi kot matrica, tako da koncentracija takšne DNA narašča eksponentno. V postopku z dvajsetimi cikli se fragment DNA pomnoži <del style="font-weight: bold; text-decoration: none;">okrog </del>milijonkrat. </div></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>PCR je tako uporabna, ker lahko tri stopnje – denaturacijo, hibridizacijo in sintezo DNA – večkrat ponovimo s preprostim spreminjanjem temperature reakcijske mešanice. Vsaka na novo sintetizirana veriga DNA lahko služi kot matrica, tako da koncentracija takšne DNA narašča eksponentno. V postopku z dvajsetimi cikli se fragment DNA pomnoži <ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">približno </ins>milijonkrat. </div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>== Principi metode ==</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>== Principi metode ==</div></td></tr>
<tr><td colspan="2" class="diff-lineno" id="mw-diff-left-l11">Line 11:</td>
<td colspan="2" class="diff-lineno">Line 11:</td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>* vse štiri deoksiribonukleozidtrifosfate</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>* vse štiri deoksiribonukleozidtrifosfate</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker" data-marker="−"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #ffe49c; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Oligonukleotidi služijo pri podvojevanju kot primerji. Od tam naprej podaljšuje DNA verigo encim <del style="font-weight: bold; text-decoration: none;">dna </del>polimeraza. Pri tem sta 3' konca verig orientirana drug proti drugemu. Na novo sintetizirani verigi ločimo s segrevanjem pri temperaturi <del style="font-weight: bold; text-decoration: none;">(</del>približno 95°C). Ko se verigi ločita, ju ponovno ohladimo. Pri nižji temperaturi lahko ponovno poteka dodajanje novih deoksiribonukleozidtrifosfatov. Če postopek večkrat ponovimo, dobimo eksponentno število sekvenc, ki smo jih želeli podvojiti. Vsa stvar se odvija v več, spodaj opisanih, korakih.</div></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Oligonukleotidi služijo pri podvojevanju kot primerji. Od tam naprej podaljšuje DNA verigo encim <ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">DNA </ins>polimeraza. Pri tem sta 3' konca verig orientirana drug proti drugemu. Na novo sintetizirani verigi ločimo s segrevanjem <ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">(</ins>pri temperaturi približno 95°C). Ko se verigi ločita, ju ponovno ohladimo. Pri nižji temperaturi lahko ponovno poteka dodajanje novih deoksiribonukleozidtrifosfatov. Če postopek večkrat ponovimo, dobimo eksponentno število sekvenc, ki smo jih želeli podvojiti. Vsa stvar se odvija v več, spodaj opisanih, korakih.</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker" data-marker="−"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #ffe49c; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>'''Iniciacijska stopnja:''' Vključuje segrevanje reakcijske zmesi na <del style="font-weight: bold; text-decoration: none;">temperaturi </del>94-95°C (če uporabljamo termostabilne polimeraze, segrevamo pri temperaturi 98°C), pri čemer tako stanje ohranimo do 9 minut. </div></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>'''Iniciacijska stopnja:''' Vključuje segrevanje reakcijske zmesi na <ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">temperaturo </ins>94-95°C (če uporabljamo termostabilne polimeraze, segrevamo pri temperaturi 98°C), pri čemer tako stanje ohranimo do 9 minut. </div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker" data-marker="−"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #ffe49c; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>'''Denaturacijska stopnja:''' <del style="font-weight: bold; text-decoration: none;">Ta korak je prvi </del>stopnja v ciklu metode PCR v kateri segrejemo reakcijsko zmes na 94-98 °C za 20-30 sekund, kar povzroči denaturacijo DNA. Pri tem se porušijo vodikove vezi med baznimi pari komplementarnih DNA verig<del style="font-weight: bold; text-decoration: none;">, </del>dobimo ločeni komplementarni verigi.</div></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>'''Denaturacijska stopnja:''' <ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">Je prva </ins>stopnja v ciklu metode PCR<ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">, </ins>v kateri segrejemo reakcijsko zmes na 94-98 °C za 20-30 sekund, kar povzroči denaturacijo DNA. Pri tem se porušijo vodikove vezi med baznimi pari komplementarnih DNA verig<ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">; </ins>dobimo ločeni komplementarni verigi.</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker" data-marker="−"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #ffe49c; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>'''Stopnja pripenjanja:''' <del style="font-weight: bold; text-decoration: none;">Stopnja pripenjanja traja </del>približno pol minute in se odvija pri temperaturi 50-65°C, saj je optimalno delovanje primerjev ravno v tem temperaturnem območju. Takrat se primerji pripnejo na komplementarno verigo DNA. V tej fazi sodeluje tudi DNA polimeraza, ki se veže na primer in začne sintezo DNA.</div></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>'''Stopnja pripenjanja:''' <ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">Traja </ins>približno pol minute in se odvija pri temperaturi 50-65°C, saj je optimalno delovanje primerjev ravno v tem temperaturnem območju. Takrat se primerji pripnejo na komplementarno verigo DNA. V tej fazi sodeluje tudi DNA polimeraza, ki se veže na primer<ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">, </ins>in začne sintezo DNA.</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker" data-marker="−"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #ffe49c; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>'''Podaljševalna stopnja:''' <del style="font-weight: bold; text-decoration: none;">stopnja </del>je odvisna od polimeraze, ki jo pri tem postopku uporabimo; npr Taq polimeraza ima svoje optimalno območje delovanja pri 75-80°C. Na splošno pa se v tej stopnji pripenjajo deoksiribonukleotidi s pomočjo <del style="font-weight: bold; text-decoration: none;">encim </del>DNA polimeraze na osnovno DNA verigo. Sinteza deoksiribonukleotidov poteka v smeri od 5' do 3'. Pri tem se 5' fosfatna skupina deoksiribonukleozidtrifosfata poveže s 3' hidroksilno skupino nastajajoče DNA verige. </div></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>'''Podaljševalna stopnja:''' <ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">Stopnja </ins>je odvisna od polimeraze, ki jo pri tem postopku uporabimo; npr Taq polimeraza ima svoje optimalno območje delovanja pri 75-80°C. Na splošno pa se v tej stopnji pripenjajo deoksiribonukleotidi s pomočjo <ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">encima </ins>DNA polimeraze na osnovno DNA verigo. Sinteza deoksiribonukleotidov poteka v smeri od 5' do 3'. Pri tem se 5' fosfatna skupina deoksiribonukleozidtrifosfata poveže s 3' hidroksilno skupino nastajajoče DNA verige. </div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>'''Zaključno podaljševanje:''' Ta korak se odvija pri temperaturi 70-74°C in traja približno 5-15 minut po zadnjem PCR ciklu. V tem procesu encim »preveri«, če se je celotna veriga podvojila.</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>'''Zaključno podaljševanje:''' Ta korak se odvija pri temperaturi 70-74°C in traja približno 5-15 minut po zadnjem PCR ciklu. V tem procesu encim »preveri«, če se je celotna veriga podvojila.</div></td></tr>
<tr><td colspan="2" class="diff-lineno" id="mw-diff-left-l25">Line 25:</td>
<td colspan="2" class="diff-lineno">Line 25:</td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>==Uporaba==</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>==Uporaba==</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker" data-marker="−"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #ffe49c; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Iznajdba PCR metode je veliko pripomogla k detekciji raznovrstnih bolezni. Tako danes s pomočjo le-te zaznajo prisotnost kužnih bakterij in virusov pri ljudeh. Uporabna pa je tudi pri potrjevanju infekcije s [http://sl.wikipedia.org/wiki/HIV HIV]. Te potrdijo s testi, ki v serumu zaznavajo protitelesa proti virusnim proteinom. Brez te metode bi HIV zaznali zelo pozno, saj se taka koncentracija pri kateri bi lahko zaznali virusna protitelesa, pri človeku tvori šele po približno šestih mesecih. Z metodo PCR pa lahko zaznamo virusno DNA že na samem začetku. Posebej pomembna je uporaba te metode pri dojenčkih, pri katerih namreč ne morejo izvesti testa s protitelesi, saj imajo še do 15 mesecev po rojstvu materina protitelesa. Drugi primeri medicinske uporabe PCR so zgodnje odkrivanje tuberkuloze in raka, predvsem levkemije in analiza majhnih vzorcev amnijske tekočine za odkrivanje genetskih nenormalnosti zarodkov.</div></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Iznajdba PCR metode je veliko pripomogla k detekciji raznovrstnih bolezni. Tako danes s pomočjo le-te zaznajo prisotnost kužnih bakterij in virusov pri ljudeh. Uporabna pa je tudi pri potrjevanju infekcije s [http://sl.wikipedia.org/wiki/HIV HIV]. Te potrdijo s testi, ki v serumu zaznavajo protitelesa proti virusnim proteinom. Brez te metode bi HIV zaznali zelo pozno, saj se taka koncentracija<ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">, </ins>pri kateri bi lahko zaznali virusna protitelesa, pri človeku tvori šele po približno šestih mesecih. Z metodo PCR pa lahko zaznamo virusno DNA že na samem začetku. Posebej pomembna je uporaba te metode pri dojenčkih, pri katerih namreč ne morejo izvesti testa s protitelesi, saj imajo še do 15 mesecev po rojstvu materina protitelesa. Drugi primeri medicinske uporabe PCR so zgodnje odkrivanje tuberkuloze in raka, predvsem levkemije in analiza majhnih vzorcev amnijske tekočine za odkrivanje genetskih nenormalnosti zarodkov.</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>==Dodatne povezave==</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>==Dodatne povezave==</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>[http://www.youtube.com/watch?v=_YgXcJ4n-kQ Video]</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>[http://www.youtube.com/watch?v=_YgXcJ4n-kQ Video]</div></td></tr>
</table>Margareta Žlajpahhttps://wiki.fkkt.uni-lj.si/index.php?title=Veri%C5%BEna_reakcija_s_polimerazo_(PCR)&diff=5105&oldid=prevMaja Kogoj at 19:24, 27 December 20102010-12-27T19:24:15Z<p></p>
<table style="background-color: #fff; color: #202122;" data-mw="interface">
<col class="diff-marker" />
<col class="diff-content" />
<col class="diff-marker" />
<col class="diff-content" />
<tr class="diff-title" lang="en">
<td colspan="2" style="background-color: #fff; color: #202122; text-align: center;">← Older revision</td>
<td colspan="2" style="background-color: #fff; color: #202122; text-align: center;">Revision as of 19:24, 27 December 2010</td>
</tr><tr><td colspan="2" class="diff-lineno" id="mw-diff-left-l25">Line 25:</td>
<td colspan="2" class="diff-lineno">Line 25:</td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>==Uporaba==</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>==Uporaba==</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker" data-marker="−"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #ffe49c; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Iznajdba PCR metode je veliko pripomogla k detekciji raznovrstnih bolezni. Tako danes s pomočjo le-te zaznajo prisotnost kužnih bakterij in virusov pri ljudeh. Uporabna pa je tudi pri potrjevanju infekcije s <del style="font-weight: bold; text-decoration: none;">[</del>[http://sl.wikipedia.org/wiki/HIV HIV<del style="font-weight: bold; text-decoration: none;">]</del>]. Te potrdijo s testi, ki v serumu zaznavajo protitelesa proti virusnim proteinom. Brez te metode bi HIV zaznali zelo pozno, saj se taka koncentracija pri kateri bi lahko zaznali virusna protitelesa, pri človeku tvori šele po približno šestih mesecih. Z metodo PCR pa lahko zaznamo virusno DNA že na samem začetku. Posebej pomembna je uporaba te metode pri dojenčkih, pri katerih namreč ne morejo izvesti testa s protitelesi, saj imajo še do 15 mesecev po rojstvu materina protitelesa. Drugi primeri medicinske uporabe PCR so zgodnje odkrivanje tuberkuloze in raka, predvsem levkemije in analiza majhnih vzorcev amnijske tekočine za odkrivanje genetskih nenormalnosti zarodkov.</div></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Iznajdba PCR metode je veliko pripomogla k detekciji raznovrstnih bolezni. Tako danes s pomočjo le-te zaznajo prisotnost kužnih bakterij in virusov pri ljudeh. Uporabna pa je tudi pri potrjevanju infekcije s [http://sl.wikipedia.org/wiki/HIV HIV]. Te potrdijo s testi, ki v serumu zaznavajo protitelesa proti virusnim proteinom. Brez te metode bi HIV zaznali zelo pozno, saj se taka koncentracija pri kateri bi lahko zaznali virusna protitelesa, pri človeku tvori šele po približno šestih mesecih. Z metodo PCR pa lahko zaznamo virusno DNA že na samem začetku. Posebej pomembna je uporaba te metode pri dojenčkih, pri katerih namreč ne morejo izvesti testa s protitelesi, saj imajo še do 15 mesecev po rojstvu materina protitelesa. Drugi primeri medicinske uporabe PCR so zgodnje odkrivanje tuberkuloze in raka, predvsem levkemije in analiza majhnih vzorcev amnijske tekočine za odkrivanje genetskih nenormalnosti zarodkov.</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>==Dodatne povezave==</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>==Dodatne povezave==</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>[http://www.youtube.com/watch?v=_YgXcJ4n-kQ Video]</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>[http://www.youtube.com/watch?v=_YgXcJ4n-kQ Video]</div></td></tr>
</table>Maja Kogojhttps://wiki.fkkt.uni-lj.si/index.php?title=Veri%C5%BEna_reakcija_s_polimerazo_(PCR)&diff=5104&oldid=prevMaja Kogoj at 19:23, 27 December 20102010-12-27T19:23:57Z<p></p>
<table style="background-color: #fff; color: #202122;" data-mw="interface">
<col class="diff-marker" />
<col class="diff-content" />
<col class="diff-marker" />
<col class="diff-content" />
<tr class="diff-title" lang="en">
<td colspan="2" style="background-color: #fff; color: #202122; text-align: center;">← Older revision</td>
<td colspan="2" style="background-color: #fff; color: #202122; text-align: center;">Revision as of 19:23, 27 December 2010</td>
</tr><tr><td colspan="2" class="diff-lineno" id="mw-diff-left-l25">Line 25:</td>
<td colspan="2" class="diff-lineno">Line 25:</td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>==Uporaba==</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>==Uporaba==</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker" data-marker="−"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #ffe49c; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Iznajdba PCR metode je veliko pripomogla k detekciji raznovrstnih bolezni. Tako danes s pomočjo le-te zaznajo prisotnost kužnih bakterij in virusov pri ljudeh. Uporabna pa je tudi pri potrjevanju infekcije s HIV. Te potrdijo s testi, ki v serumu zaznavajo protitelesa proti virusnim proteinom. Brez te metode bi HIV zaznali zelo pozno, saj se taka koncentracija pri kateri bi lahko zaznali virusna protitelesa, pri človeku tvori šele po približno šestih mesecih. Z metodo PCR pa lahko zaznamo virusno DNA že na samem začetku. Posebej pomembna je uporaba te metode pri dojenčkih, pri katerih namreč ne morejo izvesti testa s protitelesi, saj imajo še do 15 mesecev po rojstvu materina protitelesa. Drugi primeri medicinske uporabe PCR so zgodnje odkrivanje tuberkuloze in raka, predvsem levkemije in analiza majhnih vzorcev amnijske tekočine za odkrivanje genetskih nenormalnosti zarodkov.</div></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Iznajdba PCR metode je veliko pripomogla k detekciji raznovrstnih bolezni. Tako danes s pomočjo le-te zaznajo prisotnost kužnih bakterij in virusov pri ljudeh. Uporabna pa je tudi pri potrjevanju infekcije s <ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">[[http://sl.wikipedia.org/wiki/</ins>HIV <ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">HIV]]</ins>. Te potrdijo s testi, ki v serumu zaznavajo protitelesa proti virusnim proteinom. Brez te metode bi HIV zaznali zelo pozno, saj se taka koncentracija pri kateri bi lahko zaznali virusna protitelesa, pri človeku tvori šele po približno šestih mesecih. Z metodo PCR pa lahko zaznamo virusno DNA že na samem začetku. Posebej pomembna je uporaba te metode pri dojenčkih, pri katerih namreč ne morejo izvesti testa s protitelesi, saj imajo še do 15 mesecev po rojstvu materina protitelesa. Drugi primeri medicinske uporabe PCR so zgodnje odkrivanje tuberkuloze in raka, predvsem levkemije in analiza majhnih vzorcev amnijske tekočine za odkrivanje genetskih nenormalnosti zarodkov.</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>==Dodatne povezave==</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>==Dodatne povezave==</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>[http://www.youtube.com/watch?v=_YgXcJ4n-kQ Video]</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>[http://www.youtube.com/watch?v=_YgXcJ4n-kQ Video]</div></td></tr>
</table>Maja Kogojhttps://wiki.fkkt.uni-lj.si/index.php?title=Veri%C5%BEna_reakcija_s_polimerazo_(PCR)&diff=5103&oldid=prevMaja Kogoj at 19:22, 27 December 20102010-12-27T19:22:35Z<p></p>
<table style="background-color: #fff; color: #202122;" data-mw="interface">
<col class="diff-marker" />
<col class="diff-content" />
<col class="diff-marker" />
<col class="diff-content" />
<tr class="diff-title" lang="en">
<td colspan="2" style="background-color: #fff; color: #202122; text-align: center;">← Older revision</td>
<td colspan="2" style="background-color: #fff; color: #202122; text-align: center;">Revision as of 19:22, 27 December 2010</td>
</tr><tr><td colspan="2" class="diff-lineno" id="mw-diff-left-l1">Line 1:</td>
<td colspan="2" class="diff-lineno">Line 1:</td></tr>
<tr><td class="diff-marker" data-marker="−"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #ffe49c; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Raziskave na področju raziskovanja genomov organizmov ter projekt človeški genom so omogočile dostop do informacij zaporedja genov. Za takšno biokemijsko analizo potrebujemo večje količine sekvence genov, kar nam dandanes omogoča metoda PCR. PCR ali verižna reakcija s polimerazo je proces, v katerem lahko pridobimo večje količine določenega zaporedja, ki lahko meri največ 6000 baznih parov. Odkril jo je Nobelov nagrajenec Kary Mullis leta 1983.</div></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Raziskave na področju raziskovanja genomov organizmov ter projekt človeški genom so omogočile dostop do informacij zaporedja genov. Za takšno biokemijsko analizo potrebujemo večje količine sekvence genov, kar nam dandanes omogoča metoda <ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">[http://www.ucl.ac.uk/~ucbhjow/b200/images/91m-17376-pcr.gif </ins>PCR<ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">]</ins>. PCR ali verižna reakcija s polimerazo je proces, v katerem lahko pridobimo večje količine določenega zaporedja, ki lahko meri največ 6000 baznih parov. Odkril jo je Nobelov nagrajenec Kary Mullis leta 1983.</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>PCR je tako uporabna, ker lahko tri stopnje – denaturacijo, hibridizacijo in sintezo DNA – večkrat ponovimo s preprostim spreminjanjem temperature reakcijske mešanice. Vsaka na novo sintetizirana veriga DNA lahko služi kot matrica, tako da koncentracija takšne DNA narašča eksponentno. V postopku z dvajsetimi cikli se fragment DNA pomnoži okrog milijonkrat. </div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>PCR je tako uporabna, ker lahko tri stopnje – denaturacijo, hibridizacijo in sintezo DNA – večkrat ponovimo s preprostim spreminjanjem temperature reakcijske mešanice. Vsaka na novo sintetizirana veriga DNA lahko služi kot matrica, tako da koncentracija takšne DNA narašča eksponentno. V postopku z dvajsetimi cikli se fragment DNA pomnoži okrog milijonkrat. </div></td></tr>
</table>Maja Kogojhttps://wiki.fkkt.uni-lj.si/index.php?title=Veri%C5%BEna_reakcija_s_polimerazo_(PCR)&diff=5102&oldid=prevMaja Kogoj at 19:21, 27 December 20102010-12-27T19:21:06Z<p></p>
<table style="background-color: #fff; color: #202122;" data-mw="interface">
<col class="diff-marker" />
<col class="diff-content" />
<col class="diff-marker" />
<col class="diff-content" />
<tr class="diff-title" lang="en">
<td colspan="2" style="background-color: #fff; color: #202122; text-align: center;">← Older revision</td>
<td colspan="2" style="background-color: #fff; color: #202122; text-align: center;">Revision as of 19:21, 27 December 2010</td>
</tr><tr><td colspan="2" class="diff-lineno" id="mw-diff-left-l1">Line 1:</td>
<td colspan="2" class="diff-lineno">Line 1:</td></tr>
<tr><td class="diff-marker" data-marker="−"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #ffe49c; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div><del style="font-weight: bold; text-decoration: none;"></del></div></td><td colspan="2" class="diff-side-added"></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Raziskave na področju raziskovanja genomov organizmov ter projekt človeški genom so omogočile dostop do informacij zaporedja genov. Za takšno biokemijsko analizo potrebujemo večje količine sekvence genov, kar nam dandanes omogoča metoda PCR. PCR ali verižna reakcija s polimerazo je proces, v katerem lahko pridobimo večje količine določenega zaporedja, ki lahko meri največ 6000 baznih parov. Odkril jo je Nobelov nagrajenec Kary Mullis leta 1983.</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Raziskave na področju raziskovanja genomov organizmov ter projekt človeški genom so omogočile dostop do informacij zaporedja genov. Za takšno biokemijsko analizo potrebujemo večje količine sekvence genov, kar nam dandanes omogoča metoda PCR. PCR ali verižna reakcija s polimerazo je proces, v katerem lahko pridobimo večje količine določenega zaporedja, ki lahko meri največ 6000 baznih parov. Odkril jo je Nobelov nagrajenec Kary Mullis leta 1983.</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td colspan="2" class="diff-lineno" id="mw-diff-left-l27">Line 27:</td>
<td colspan="2" class="diff-lineno">Line 26:</td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Iznajdba PCR metode je veliko pripomogla k detekciji raznovrstnih bolezni. Tako danes s pomočjo le-te zaznajo prisotnost kužnih bakterij in virusov pri ljudeh. Uporabna pa je tudi pri potrjevanju infekcije s HIV. Te potrdijo s testi, ki v serumu zaznavajo protitelesa proti virusnim proteinom. Brez te metode bi HIV zaznali zelo pozno, saj se taka koncentracija pri kateri bi lahko zaznali virusna protitelesa, pri človeku tvori šele po približno šestih mesecih. Z metodo PCR pa lahko zaznamo virusno DNA že na samem začetku. Posebej pomembna je uporaba te metode pri dojenčkih, pri katerih namreč ne morejo izvesti testa s protitelesi, saj imajo še do 15 mesecev po rojstvu materina protitelesa. Drugi primeri medicinske uporabe PCR so zgodnje odkrivanje tuberkuloze in raka, predvsem levkemije in analiza majhnih vzorcev amnijske tekočine za odkrivanje genetskih nenormalnosti zarodkov.</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Iznajdba PCR metode je veliko pripomogla k detekciji raznovrstnih bolezni. Tako danes s pomočjo le-te zaznajo prisotnost kužnih bakterij in virusov pri ljudeh. Uporabna pa je tudi pri potrjevanju infekcije s HIV. Te potrdijo s testi, ki v serumu zaznavajo protitelesa proti virusnim proteinom. Brez te metode bi HIV zaznali zelo pozno, saj se taka koncentracija pri kateri bi lahko zaznali virusna protitelesa, pri človeku tvori šele po približno šestih mesecih. Z metodo PCR pa lahko zaznamo virusno DNA že na samem začetku. Posebej pomembna je uporaba te metode pri dojenčkih, pri katerih namreč ne morejo izvesti testa s protitelesi, saj imajo še do 15 mesecev po rojstvu materina protitelesa. Drugi primeri medicinske uporabe PCR so zgodnje odkrivanje tuberkuloze in raka, predvsem levkemije in analiza majhnih vzorcev amnijske tekočine za odkrivanje genetskih nenormalnosti zarodkov.</div></td></tr>
<tr><td colspan="2" class="diff-side-deleted"></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div><ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;"></ins></div></td></tr>
<tr><td colspan="2" class="diff-side-deleted"></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div><ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">==Dodatne povezave==</ins></div></td></tr>
<tr><td colspan="2" class="diff-side-deleted"></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div><ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">[http://www.youtube.com/watch?v=_YgXcJ4n-kQ Video]</ins></div></td></tr>
</table>Maja Kogojhttps://wiki.fkkt.uni-lj.si/index.php?title=Veri%C5%BEna_reakcija_s_polimerazo_(PCR)&diff=5101&oldid=prevMaja Kogoj at 19:13, 27 December 20102010-12-27T19:13:34Z<p></p>
<table style="background-color: #fff; color: #202122;" data-mw="interface">
<col class="diff-marker" />
<col class="diff-content" />
<col class="diff-marker" />
<col class="diff-content" />
<tr class="diff-title" lang="en">
<td colspan="2" style="background-color: #fff; color: #202122; text-align: center;">← Older revision</td>
<td colspan="2" style="background-color: #fff; color: #202122; text-align: center;">Revision as of 19:13, 27 December 2010</td>
</tr><tr><td colspan="2" class="diff-lineno" id="mw-diff-left-l1">Line 1:</td>
<td colspan="2" class="diff-lineno">Line 1:</td></tr>
<tr><td class="diff-marker" data-marker="−"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #ffe49c; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div><del style="font-weight: bold; text-decoration: none;">== Verižna reakcija s polimerazo (PCR) ==</del></div></td><td colspan="2" class="diff-side-added"></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Raziskave na področju raziskovanja genomov organizmov ter projekt človeški genom so omogočile dostop do informacij zaporedja genov. Za takšno biokemijsko analizo potrebujemo večje količine sekvence genov, kar nam dandanes omogoča metoda PCR. PCR ali verižna reakcija s polimerazo je proces, v katerem lahko pridobimo večje količine določenega zaporedja, ki lahko meri največ 6000 baznih parov. Odkril jo je Nobelov nagrajenec Kary Mullis leta 1983.</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Raziskave na področju raziskovanja genomov organizmov ter projekt človeški genom so omogočile dostop do informacij zaporedja genov. Za takšno biokemijsko analizo potrebujemo večje količine sekvence genov, kar nam dandanes omogoča metoda PCR. PCR ali verižna reakcija s polimerazo je proces, v katerem lahko pridobimo večje količine določenega zaporedja, ki lahko meri največ 6000 baznih parov. Odkril jo je Nobelov nagrajenec Kary Mullis leta 1983.</div></td></tr>
<tr><td colspan="2" class="diff-lineno" id="mw-diff-left-l15">Line 15:</td>
<td colspan="2" class="diff-lineno">Line 14:</td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Oligonukleotidi služijo pri podvojevanju kot primerji. Od tam naprej podaljšuje DNA verigo encim dna polimeraza. Pri tem sta 3' konca verig orientirana drug proti drugemu. Na novo sintetizirani verigi ločimo s segrevanjem pri temperaturi (približno 95°C). Ko se verigi ločita, ju ponovno ohladimo. Pri nižji temperaturi lahko ponovno poteka dodajanje novih deoksiribonukleozidtrifosfatov. Če postopek večkrat ponovimo, dobimo eksponentno število sekvenc, ki smo jih želeli podvojiti. Vsa stvar se odvija v več, spodaj opisanih, korakih.</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Oligonukleotidi služijo pri podvojevanju kot primerji. Od tam naprej podaljšuje DNA verigo encim dna polimeraza. Pri tem sta 3' konca verig orientirana drug proti drugemu. Na novo sintetizirani verigi ločimo s segrevanjem pri temperaturi (približno 95°C). Ko se verigi ločita, ju ponovno ohladimo. Pri nižji temperaturi lahko ponovno poteka dodajanje novih deoksiribonukleozidtrifosfatov. Če postopek večkrat ponovimo, dobimo eksponentno število sekvenc, ki smo jih želeli podvojiti. Vsa stvar se odvija v več, spodaj opisanih, korakih.</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker" data-marker="−"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #ffe49c; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Iniciacijska stopnja : Vključuje segrevanje reakcijske zmesi na temperaturi 94-95°C (če uporabljamo termostabilne polimeraze, segrevamo pri temperaturi 98°C), pri čemer tako stanje ohranimo do 9 minut. </div></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div><ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">'''</ins>Iniciacijska stopnja:<ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">''' </ins>Vključuje segrevanje reakcijske zmesi na temperaturi 94-95°C (če uporabljamo termostabilne polimeraze, segrevamo pri temperaturi 98°C), pri čemer tako stanje ohranimo do 9 minut. </div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker" data-marker="−"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #ffe49c; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Denaturacijska stopnja: Ta korak je prvi stopnja v ciklu metode PCR v kateri segrejemo reakcijsko zmes na 94-98 °C za 20-30 sekund, kar povzroči denaturacijo DNA. Pri tem se porušijo vodikove vezi med baznimi pari komplementarnih DNA verig, dobimo ločeni komplementarni verigi.</div></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div> </div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker" data-marker="−"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #ffe49c; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Stopnja pripenjanja: Stopnja pripenjanja traja približno pol minute in se odvija pri temperaturi 50-65°C, saj je optimalno delovanje primerjev ravno v tem temperaturnem območju. Takrat se primerji pripnejo na komplementarno verigo DNA. V tej fazi sodeluje tudi DNA polimeraza, ki se veže na primer in začne sintezo DNA.</div></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div><ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">'''</ins>Denaturacijska stopnja:<ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">''' </ins>Ta korak je prvi stopnja v ciklu metode PCR v kateri segrejemo reakcijsko zmes na 94-98 °C za 20-30 sekund, kar povzroči denaturacijo DNA. Pri tem se porušijo vodikove vezi med baznimi pari komplementarnih DNA verig, dobimo ločeni komplementarni verigi.</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker" data-marker="−"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #ffe49c; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Podaljševalna stopnja: stopnja je odvisna od polimeraze, ki jo pri tem postopku uporabimo; npr Taq polimeraza ima svoje optimalno območje delovanja pri 75-80°C. Na splošno pa se v tej stopnji pripenjajo deoksiribonukleotidi s pomočjo encim DNA polimeraze na osnovno DNA verigo. Sinteza deoksiribonukleotidov poteka v smeri od 5' do 3'. Pri tem se 5' fosfatna skupina deoksiribonukleozidtrifosfata poveže s 3' hidroksilno skupino nastajajoče DNA verige. </div></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div> </div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker" data-marker="−"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #ffe49c; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Zaključno podaljševanje: Ta korak se odvija pri temperaturi 70-74°C in traja približno 5-15 minut po zadnjem PCR ciklu. V tem procesu encim »preveri«, če se je celotna veriga podvojila.</div></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div><ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">'''</ins>Stopnja pripenjanja:<ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">''' </ins>Stopnja pripenjanja traja približno pol minute in se odvija pri temperaturi 50-65°C, saj je optimalno delovanje primerjev ravno v tem temperaturnem območju. Takrat se primerji pripnejo na komplementarno verigo DNA. V tej fazi sodeluje tudi DNA polimeraza, ki se veže na primer in začne sintezo DNA.</div></td></tr>
<tr><td colspan="2" class="diff-side-deleted"></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div> </div></td></tr>
<tr><td colspan="2" class="diff-side-deleted"></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div><ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">'''</ins>Podaljševalna stopnja:<ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">''' </ins>stopnja je odvisna od polimeraze, ki jo pri tem postopku uporabimo; npr Taq polimeraza ima svoje optimalno območje delovanja pri 75-80°C. Na splošno pa se v tej stopnji pripenjajo deoksiribonukleotidi s pomočjo encim DNA polimeraze na osnovno DNA verigo. Sinteza deoksiribonukleotidov poteka v smeri od 5' do 3'. Pri tem se 5' fosfatna skupina deoksiribonukleozidtrifosfata poveže s 3' hidroksilno skupino nastajajoče DNA verige. </div></td></tr>
<tr><td colspan="2" class="diff-side-deleted"></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div> </div></td></tr>
<tr><td colspan="2" class="diff-side-deleted"></td><td class="diff-marker" data-marker="+"></td><td style="color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #a3d3ff; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div><ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">'''</ins>Zaključno podaljševanje:<ins style="font-weight: bold; text-decoration: none;">''' </ins>Ta korak se odvija pri temperaturi 70-74°C in traja približno 5-15 minut po zadnjem PCR ciklu. V tem procesu encim »preveri«, če se je celotna veriga podvojila.</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>==Uporaba==</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>==Uporaba==</div></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><br/></td></tr>
<tr><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Iznajdba PCR metode je veliko pripomogla k detekciji raznovrstnih bolezni. Tako danes s pomočjo le-te zaznajo prisotnost kužnih bakterij in virusov pri ljudeh. Uporabna pa je tudi pri potrjevanju infekcije s HIV. Te potrdijo s testi, ki v serumu zaznavajo protitelesa proti virusnim proteinom. Brez te metode bi HIV zaznali zelo pozno, saj se taka koncentracija pri kateri bi lahko zaznali virusna protitelesa, pri človeku tvori šele po približno šestih mesecih. Z metodo PCR pa lahko zaznamo virusno DNA že na samem začetku. Posebej pomembna je uporaba te metode pri dojenčkih, pri katerih namreč ne morejo izvesti testa s protitelesi, saj imajo še do 15 mesecev po rojstvu materina protitelesa. Drugi primeri medicinske uporabe PCR so zgodnje odkrivanje tuberkuloze in raka, predvsem levkemije in analiza majhnih vzorcev amnijske tekočine za odkrivanje genetskih nenormalnosti zarodkov.</div></td><td class="diff-marker"></td><td style="background-color: #f8f9fa; color: #202122; font-size: 88%; border-style: solid; border-width: 1px 1px 1px 4px; border-radius: 0.33em; border-color: #eaecf0; vertical-align: top; white-space: pre-wrap;"><div>Iznajdba PCR metode je veliko pripomogla k detekciji raznovrstnih bolezni. Tako danes s pomočjo le-te zaznajo prisotnost kužnih bakterij in virusov pri ljudeh. Uporabna pa je tudi pri potrjevanju infekcije s HIV. Te potrdijo s testi, ki v serumu zaznavajo protitelesa proti virusnim proteinom. Brez te metode bi HIV zaznali zelo pozno, saj se taka koncentracija pri kateri bi lahko zaznali virusna protitelesa, pri človeku tvori šele po približno šestih mesecih. Z metodo PCR pa lahko zaznamo virusno DNA že na samem začetku. Posebej pomembna je uporaba te metode pri dojenčkih, pri katerih namreč ne morejo izvesti testa s protitelesi, saj imajo še do 15 mesecev po rojstvu materina protitelesa. Drugi primeri medicinske uporabe PCR so zgodnje odkrivanje tuberkuloze in raka, predvsem levkemije in analiza majhnih vzorcev amnijske tekočine za odkrivanje genetskih nenormalnosti zarodkov.</div></td></tr>
</table>Maja Kogojhttps://wiki.fkkt.uni-lj.si/index.php?title=Veri%C5%BEna_reakcija_s_polimerazo_(PCR)&diff=5100&oldid=prevMaja Kogoj: New page: == Verižna reakcija s polimerazo (PCR) == Raziskave na področju raziskovanja genomov organizmov ter projekt človeški genom so omogočile dostop do informacij zaporedja genov. Za takš...2010-12-27T19:12:32Z<p>New page: == Verižna reakcija s polimerazo (PCR) == Raziskave na področju raziskovanja genomov organizmov ter projekt človeški genom so omogočile dostop do informacij zaporedja genov. Za takš...</p>
<p><b>New page</b></p><div>== Verižna reakcija s polimerazo (PCR) ==<br />
<br />
Raziskave na področju raziskovanja genomov organizmov ter projekt človeški genom so omogočile dostop do informacij zaporedja genov. Za takšno biokemijsko analizo potrebujemo večje količine sekvence genov, kar nam dandanes omogoča metoda PCR. PCR ali verižna reakcija s polimerazo je proces, v katerem lahko pridobimo večje količine določenega zaporedja, ki lahko meri največ 6000 baznih parov. Odkril jo je Nobelov nagrajenec Kary Mullis leta 1983.<br />
<br />
PCR je tako uporabna, ker lahko tri stopnje – denaturacijo, hibridizacijo in sintezo DNA – večkrat ponovimo s preprostim spreminjanjem temperature reakcijske mešanice. Vsaka na novo sintetizirana veriga DNA lahko služi kot matrica, tako da koncentracija takšne DNA narašča eksponentno. V postopku z dvajsetimi cikli se fragment DNA pomnoži okrog milijonkrat. <br />
<br />
== Principi metode ==<br />
<br />
<br />
Za reakcijo z verižno polimerazo potrebujemo:<br />
* 2 sintetična oligonukleotida dolga po približno 20 nukleotidov, s komplementarno sekvenco<br />
* termostabilno polimerazo<br />
* vse štiri deoksiribonukleozidtrifosfate<br />
<br />
Oligonukleotidi služijo pri podvojevanju kot primerji. Od tam naprej podaljšuje DNA verigo encim dna polimeraza. Pri tem sta 3' konca verig orientirana drug proti drugemu. Na novo sintetizirani verigi ločimo s segrevanjem pri temperaturi (približno 95°C). Ko se verigi ločita, ju ponovno ohladimo. Pri nižji temperaturi lahko ponovno poteka dodajanje novih deoksiribonukleozidtrifosfatov. Če postopek večkrat ponovimo, dobimo eksponentno število sekvenc, ki smo jih želeli podvojiti. Vsa stvar se odvija v več, spodaj opisanih, korakih.<br />
<br />
Iniciacijska stopnja : Vključuje segrevanje reakcijske zmesi na temperaturi 94-95°C (če uporabljamo termostabilne polimeraze, segrevamo pri temperaturi 98°C), pri čemer tako stanje ohranimo do 9 minut. <br />
Denaturacijska stopnja: Ta korak je prvi stopnja v ciklu metode PCR v kateri segrejemo reakcijsko zmes na 94-98 °C za 20-30 sekund, kar povzroči denaturacijo DNA. Pri tem se porušijo vodikove vezi med baznimi pari komplementarnih DNA verig, dobimo ločeni komplementarni verigi.<br />
Stopnja pripenjanja: Stopnja pripenjanja traja približno pol minute in se odvija pri temperaturi 50-65°C, saj je optimalno delovanje primerjev ravno v tem temperaturnem območju. Takrat se primerji pripnejo na komplementarno verigo DNA. V tej fazi sodeluje tudi DNA polimeraza, ki se veže na primer in začne sintezo DNA.<br />
Podaljševalna stopnja: stopnja je odvisna od polimeraze, ki jo pri tem postopku uporabimo; npr Taq polimeraza ima svoje optimalno območje delovanja pri 75-80°C. Na splošno pa se v tej stopnji pripenjajo deoksiribonukleotidi s pomočjo encim DNA polimeraze na osnovno DNA verigo. Sinteza deoksiribonukleotidov poteka v smeri od 5' do 3'. Pri tem se 5' fosfatna skupina deoksiribonukleozidtrifosfata poveže s 3' hidroksilno skupino nastajajoče DNA verige. <br />
Zaključno podaljševanje: Ta korak se odvija pri temperaturi 70-74°C in traja približno 5-15 minut po zadnjem PCR ciklu. V tem procesu encim »preveri«, če se je celotna veriga podvojila.<br />
<br />
==Uporaba==<br />
<br />
Iznajdba PCR metode je veliko pripomogla k detekciji raznovrstnih bolezni. Tako danes s pomočjo le-te zaznajo prisotnost kužnih bakterij in virusov pri ljudeh. Uporabna pa je tudi pri potrjevanju infekcije s HIV. Te potrdijo s testi, ki v serumu zaznavajo protitelesa proti virusnim proteinom. Brez te metode bi HIV zaznali zelo pozno, saj se taka koncentracija pri kateri bi lahko zaznali virusna protitelesa, pri človeku tvori šele po približno šestih mesecih. Z metodo PCR pa lahko zaznamo virusno DNA že na samem začetku. Posebej pomembna je uporaba te metode pri dojenčkih, pri katerih namreč ne morejo izvesti testa s protitelesi, saj imajo še do 15 mesecev po rojstvu materina protitelesa. Drugi primeri medicinske uporabe PCR so zgodnje odkrivanje tuberkuloze in raka, predvsem levkemije in analiza majhnih vzorcev amnijske tekočine za odkrivanje genetskih nenormalnosti zarodkov.</div>Maja Kogoj