Wiki FKKT - User contributions [en]

ZVIŠEVANJE OCENE

2013-12-19T09:26:22Z

Andrea Grof:

30017949

30017952

30017941

30017940

Transgenske kokoši

2013-11-22T12:11:14Z

Andrea Grof: New page: = IZRAŽANJE HUMANE EKSTRACELULARNE SUPEROKSID DISMUTAZE V TRANSGENSKIH KOKOŠIH = [[http://www.bmbreports.org/jbmb/pdf.php?data=MTMxMTIyMThAcGRmX3JhaW50cmFjZV9sZWV5c0AlNUI0Ni04JTVEMTMwOD...

= IZRAŽANJE HUMANE EKSTRACELULARNE SUPEROKSID DISMUTAZE V TRANSGENSKIH KOKOŠIH =

[[http://www.bmbreports.org/jbmb/pdf.php?data=MTMxMTIyMThAcGRmX3JhaW50cmFjZV9sZWV5c0AlNUI0Ni04JTVEMTMwODI4MjIzMV80MDQucGRm Byun SJ et al. Human extracellular superoxide dismutaze (EC-SOD) expression in transgenic chicken.]]

== Uvod ==

Superoksid dismutaza (SOD) je metaloprotein z antioksidativno encimsko funkcijo. Encimi iz družine SOD
so deloma odgovorni za vzdrževanje nizkih vrednosti reaktivnih kisikovih zvrsti - to jim omogoča lastnost
presnavljanja superoksidnega aniona v kisik in vodikov peroksid. Ena izmed 3 izoform encima je ekstracelularna
SOD (EC-SOD). Le-ta je homotetrameren glikoprotein z vsebnostjo Cu in Zn in visoko afiniteto za heparin ter ostale
sulfonirane glikozaminoglikane. Izražanje EC-SOD je visoko v pljučih, ledvicah, maternici in krvnih žilah.
Nahaja se v ekstracelularnem matriksu in je edini antioksidant, ki cepi superoksid v ekstracelularnem
kompartmentu. Pred oksidativnim stresom naj bi ščitila možgane, pljuča in ostala tkiva. Rekombinantno
EC-SOD so doslej izrazili v CHO celicah, insektnih celicah, ''Pichii pastoris'' in ''E. coli'', avtorji pa so jo
prvič izrazili v ptičih.

Za dotično raziskavo so se odločili zaradi naraščajoče pomembnosti in zahtev po biofarmacevtskih proteinih,
katerih proizvodnja pa je draga in časovno potratna. Avtorji so mnenja, da so za proizvodnjo farmacevtskih
proteinov potrebne alternativne platforme in da je ena izmed možnosti uporaba transgenske živine kot bioreaktorjev.
Transgenske kokoši imajo pred transgenskimi sesalci številne prednosti - sesalci potrebujejo relativno veliko
površino za vzrejo, poleg tega pa je potrebnih nekaj let, da dosežejo spolno zrelost. V nasprotju s tem kokoši
hitro dosežejo spolno zrelost, za vzrejo potrebujemo malo prostora, proizvedejo veliko jajc, ter ni prisotnih
prionskih bolezni. Poleg tega imajo N-glikozilirani ogljikovi hidrati na koncu N-acetilnevramično kislino, kot je
to pri ljudeh.

== Povzetek metod in materialov ==

Najučinkovitejša metoda za ustvarjanje transgenskih ptičev je z uporabo lentivirusnih vektorjev, ki jih vnesemo v
embrije sveže izleglih jajc. Avtorji so uporabili lentivirusni vektor, sestavljen iz: 5' dolge terminalne ponovitve,
CMV promotorja, promotorja kokošjega ovalbumina, za katerim so vstavili gen za humano EC-SOD, promotorja SV40, gena
za rezistenco na blasticidin in 3' dolge terminalne ponovitve. Lentivirusni vektor so psevdotipizirali z glikoproteinom
virusa vezikularnega stomatitisa. V centralni del subgerminalne votline so v sveže izglegla jajca injicirali
približno 5000 virusnih delcev na jajce.

== Povzetek rezultatov ==

=== 1 Ustvarjanje transgenskih kokoši, ki izražajo hEC-SOD ===

S 5000 virusnimi delci na jajce so injicirali 158 jajc, izvalilo se je 16 G0 piščancev. Ko so dosegli spolno
zrelost, so z verižno reakcijo s polimerazo (PCR) analizirali semensko tekočino 7 preživelih petelinov. Eden (A354)
je bil nosilec tujega gena.
Transgenskega petelina so križali s kokošjo divjega tipa, izvalilo se je 1195 piščancev. Med njimi sta bila dva
transgenska (G1; G435, H148). Insercijo hEC-SOD so potrdili s Southern blot analizo.
Oba ptiča sta bila moškega spola. Križali so ju s kokošmi divjega tipa, izvalilo se je 122 piščancev G2. Z analizo
PCR so ugotovili, da je razmerje transgenskih proti ne-transgenskim piščancem 56/122 (G435, 30/60; H148, 26/62) in
da ni signifikantnega odstopanja od razmerja, pričakovanega glede na dedovanje po Mendlovih zakonih. Naključno
so izbrali 6 G2 piščancev in jih skupaj z obema G1 petelinoma analizirali, da bi ugotovili število kopij tujega
gena. Vsi so imeli eno kopijo transgena in isto mesto insercije, iz česar so sklepali, da so vsi potomci istega
prekurzorja zarodne celice. Za ugotavljanje mesta insercije hEC-SOD so analizirali genomsko DNA petelina G435.

=== 2 Tkivno specifično izražanje hEC-SOD v jajcevodih transgenskih kokoši ===

Da bi se rekombinantni protein izrazil tkivno specifično, v jajcevodih kokoši, so v lentivirusni vektor vstavili
5' regulatorno sekvenco kokošjega ovalbumina. Analiza RT-PCR je pokazala, da se je mRNA hEC-SOD uspešno izrazila
v jajcevodih transgenskih kokoši.
Transkripti mRNA so bili večinoma omejeni na jajcevode, so pa detektirali tudi ektopično izražanje transgena,
in sicer v trebušni slinavki, črevesju in možganskem tkivu.

=== 3 Rekombinantni protein hEC-SOD iz beljaka je funkcionalen ===

Zbrali so jajca kokoši divjega tipa kot tudi jajca treh hemizigotnih kokoši G2. Rekombinanten hEC-SOD protein se je
izražal v jajčnih beljakih transgenskih kokoši.
Približna velikost protein je bila 30 kDa, koncentracija pa med 10 in 59 ng/mL.
Da bi ugotovili, če je protein funkcionalen, so naredili test, s katerim so merili antioksidativno aktivnost
proteina - rezultati so kazali na višjo antioksidativno aktivnost kot pri divjem tipu.

== Zaključki ==

Avtorji so razvili nov sistem za produkcijo rekombinantne hEC-SOD z uporabo transgenskih kokoši oz. izražanja tega protein
v beljakih transgenskih kokoši. Takšni sistemi so dobra perspektiva za komercialno produkcijo rekombinantnih proteinov.

Seminarji TehDNA

2013-10-08T18:43:20Z

Andrea Grof:

Seminarje iz Tehnologije DNA bo v študijskem letu 2013/14 vodila asist. dr. Helena Čelešnik.

Seznam tem za seminarje:

# Mutageneza (16.10.) (povzetek in porocilo lahko oddate v pon., 14.10), 3 seminarji:
# Izražanje na površini (23.10.), 3 seminarji:
# Dvohibridni sistemi (30.10.), 3 seminarji: 1. Katja Kovačič 2. Barbara Žužek 3. Bernarda Majc
# Mutageneza, izražanje na površini ali dvohibridni sistemi (6.11.), 3 seminarji: 1. Valter Bergant, 2. Ana Kapraljević, 3. Tjaša Blatnik
# GSO v agronomiji (13.11.), 3 seminarji: 1. Niki Bursič, 2. Petra Malavašič, 3. Jernej Mustar
# Transgenske živali (27.11.), 3 seminarji: 1. Andrea Grof, 2. Eva Lucija Kozak, 3. Špela Pohleven
# Izvorne celice (4.12.), 4 seminarji: 1. Sara Primec, 2. Alja Zottel, 3. Tjaša Goričan, 4. Rok Štemberger
# DNA-diagnostika (11.12.), 4 seminarji: 1. Tina Gregorič , 2. Eva Knapič, 3. Veronika Jarc, 4. Jana Verbančič
# Forenzika, arheologija, sistematika (18.12.), 3 seminarji: 1. Matja Zalar, 2. Andreja Bratovš, 3. Maja Remškar
# Mikromreže, genomike (8.1.), 3 seminarji: 1. Andrej Vrankar, 2. Filip Kolenc 3. Nastja Štemberger
# Gensko zdravljenje s. lat. (15.1.), 3 seminarji: 1. Ana Dolinar 2. Staša Komljenovič

Seminarji TehDNA

2013-10-08T18:35:39Z

Andrea Grof:

Seminarji TehDNA

2013-10-08T18:21:04Z

Andrea Grof:

Seminarje iz Tehnologije DNA bo v študijskem letu 2013/14 vodila asist. dr. Helena Čelešnik.

Seznam tem za seminarje:

# Mutageneza (16.10.) (povzetek in porocilo lahko oddate v pon., 14.10), 3 seminarji:
# Izražanje na površini (23.10.), 3 seminarji:
# Dvohibridni sistemi (30.10.), 3 seminarji: 1. Katja Kovačič
# Mutageneza, izražanje na površini ali dvohibridni sistemi (6.11.), 3 seminarji: 1. Valter Bergant, 2. Ana Kapraljević, 3. Tjaša Blatnik
# GSO v agronomiji (13.11.), 3 seminarji: 1. Niki Bursič, 2. Petra Malavašič, 3. Jernej Mustar
# Transgenske živali (27.11.), 3 seminarji: 1. Andrea Grof, 2. Eva Lucija Kozak, 3. Špela Pohleven
# Izvorne celice (4.12.), 4 seminarji: 1. Sara Primec, 2. Alja Zottel, 3. Tjaša Goričan, 4. Rok Štemberger
# DNA-diagnostika (11.12.), 4 seminarji: 1. Tina Gregorič , 2. Eva Knapič, 3. Veronika Jarc, 4. Jana Verbančič
# Forenzika, arheologija, sistematika (18.12.), 3 seminarji: 1. Matja Zalar, 2. Andreja Bratovš, 3. Maja Remškar
# Mikromreže, genomike (8.1.), 3 seminarji: 1. Andrej Vrankar, 2. Filip Kolenc 3. Nastja Štemberger
# Gensko zdravljenje s. lat. (15.1.), 3 seminarji: 1. Ana Dolinar

Seminarji TehDNA

2013-10-08T18:20:28Z

Andrea Grof:

Seminarje iz Tehnologije DNA bo v študijskem letu 2013/14 vodila asist. dr. Helena Čelešnik.

Seznam tem za seminarje:

# Mutageneza (16.10.) (povzetek in porocilo lahko oddate v pon., 14.10), 3 seminarji:
# Izražanje na površini (23.10.), 3 seminarji:
# Dvohibridni sistemi (30.10.), 3 seminarji: 1. Katja Kovačič
# Mutageneza, izražanje na površini ali dvohibridni sistemi (6.11.), 3 seminarji: 1. Valter Bergant, 2. Ana Kapraljević, 3. Tjaša Blatnik
# GSO v agronomiji (13.11.), 3 seminarji: 1. Niki Bursič, 2. Petra Malavašič, 3. Jernej Mustar
# Transgenske živali (27.11.), 3 seminarji: 1. Andrea Grof, 2. Eva Lucija Kozak, 3. Špela Pohleven
# Izvorne celice (4.12.), 4 seminarji: 1. Sara Primec, 2. Alja Zottel, 3. Tjaša Goričan, 4. Rok Štemberger
# DNA-diagnostika (11.12.), 4 seminarji: 1. Tina Gregorič , 2. Eva Knapič, 3. Veronika Jarc, 4. Jana Verbančič
# Forenzika, arheologija, sistematika (18.12.), 3 seminarji: 1. Matja Zalar, 2. Andreja Bratovš, 3. Maja Remškar
# Mikromreže, genomike (8.1.), 3 seminarji: 1. Andrej Vrankar, 2. Filip Kolenc
# Gensko zdravljenje s. lat. (15.1.), 3 seminarji: 1. Ana Dolinar 2. Nastja Štemberger

Seminarji TehDNA

2013-10-08T18:20:14Z

Andrea Grof:

Seminarje iz Tehnologije DNA bo v študijskem letu 2013/14 vodila asist. dr. Helena Čelešnik.

Seznam tem za seminarje:

# Mutageneza (16.10.) (povzetek in porocilo lahko oddate v pon., 14.10), 3 seminarji:
# Izražanje na površini (23.10.), 3 seminarji:
# Dvohibridni sistemi (30.10.), 3 seminarji: 1. Katja Kovačič
# Mutageneza, izražanje na površini ali dvohibridni sistemi (6.11.), 3 seminarji: 1. Valter Bergant, 2. Ana Kapraljević, 3. Tjaša Blatnik
# GSO v agronomiji (13.11.), 3 seminarji: 1. Niki Bursič, 2. Petra Malavašič, 3. Jernej Mustar
# Transgenske živali (27.11.), 3 seminarji: 1. Andrea Grof, 2. Eva Lucija Kozak, 3. Špela Pohleven
# Izvorne celice (4.12.), 4 seminarji: 1. Sara Primec, 2. Alja Zottel, 3. Tjaša Goričan, 4. Rok Štemberger
# DNA-diagnostika (11.12.), 4 seminarji: 1. Tina Gregorič , 2. Eva Knapič, 3. Veronika Jarc, 4. Jana Verbančič
# Forenzika, arheologija, sistematika (18.12.), 3 seminarji: 1. Matja Zalar, 2. Andreja Bratovš, 3. Maja Remškar
# Mikromreže, genomike (8.1.), 3 seminarji: 1. Andrej Vrankar, 2. Filip Kolenc
# Gensko zdravljenje s. lat. (15.1.), 3 seminarji: 1. Ana Dolinar 3. Nastja Štemberger

Seminarji TehDNA

2013-10-08T14:10:49Z

Andrea Grof:

Seminarje iz Tehnologije DNA bo v študijskem letu 2013/14 vodila asist. dr. Helena Čelešnik.

Seznam tem za seminarje:

# Mutageneza (16.10.)
# Izražanje na površini (23.10.)
# Dvohibridni sistemi (30.10.)
# Mikromrežne tehnologije (6.11.)
# GSO v agronomiji (13.11.) Niki Bursič
# Transgenske živali (27.11.) Andrea Grof, Eva Lucija Kozak
# Izvorne celice (4.12.) Sara Primec, Alja Zottel, Tjaša Goričan
# DNA-diagnostika (11.12.) Tina Gregorič , Eva Knapič, Veronika Jarc
# Forenzika, arheologija, sistematika (18.12.)
# Mikromreže, genomike (8.1.)
# Gensko zdravljenje s. lat. (15.1.)

Seminarji TehDNA

2013-10-08T13:24:57Z

Andrea Grof:

Seminarje iz Tehnologije DNA bo v študijskem letu 2013/14 vodila asist. dr. Helena Čelešnik.

Seznam tem za seminarje:

# Mutageneza (16.10.)
# Izražanje na površini (23.10.)
# Dvohibridni sistemi (30.10.)
# Mikromrežne tehnologije (6.11.)
# GSO v agronomiji (13.11.)
# Transgenske živali (27.11.) Andrea Grof
# Izvorne celice (4.12.)
# DNA-diagnostika (11.12.)
# Forenzika, arheologija, sistematika (18.12.)
# Mikromreže, genomike (8.1.)
# Gensko zdravljenje s. lat. (15.1.)