Plazmidna DNA pri zdravljenju tumorjev - Revision history

Zala.kramar: /* Primeri */

2024-05-12T07:13:14Z

Primeri

← Older revision		Revision as of 07:13, 12 May 2024
Line 34:		Line 34:
	===Primeri===		===Primeri===
	Miši, ki so bile okužene s človeškimi celicami raka dojke, ki so na membrani imele tirozin kinazne receptorje (Erb-B-2), so zdravili s plazmidom, ki je kodiral anti-ErbB-2 DMAb. Rezultat takega zdravljenja je bil konstantno izražanje protiteles, ki so se vezala na Erb-B-2 in povzročila uničenje tumorskih celic. Protitumorski učinek je bil enak skoraj štirim odmerkom intravenoznega injiciranega protitelesa Herceptin, zaviralca Erb-B2 receptorja, terapevtski učinek pa je bil dolgotrajnejši.		Miši, ki so bile okužene s človeškimi celicami raka dojke, ki so na membrani imele tirozin kinazne receptorje (Erb-B-2), so zdravili s plazmidom, ki je kodiral anti-ErbB-2 DMAb. Rezultat takega zdravljenja je bil konstantno izražanje protiteles, ki so se vezala na Erb-B-2 in povzročila uničenje tumorskih celic. Protitumorski učinek je bil enak skoraj štirim odmerkom intravenoznega injiciranega protitelesa Herceptin, zaviralca Erb-B2 receptorja, terapevtski učinek pa je bil dolgotrajnejši.

	Podobno študijo so izvedli tudi pri raku prostate, z uporabo plazmida, ki je kodiral monoklonsko protitelo proti prostati specifičnemu membranskemu antigenu (PSMA). Opazili so nadzorovano rast tumorja in preživetje miši, ki so bile zdravljene s tem plazmidom. Ta protitumorski učinek lahko poteka preko citotoksičnosti, odvisne od protiteles, tako da protitelesa sprožijo aktivnost naravnih celic ubijalk.		Podobno študijo so izvedli tudi pri raku prostate, z uporabo plazmida, ki je kodiral monoklonsko protitelo proti prostati specifičnemu membranskemu antigenu (PSMA). Opazili so nadzorovano rast tumorja in preživetje miši, ki so bile zdravljene s tem plazmidom. Ta protitumorski učinek lahko poteka preko citotoksičnosti, odvisne od protiteles, tako da protitelesa sprožijo aktivnost naravnih celic ubijalk.

	Konstruirali so tudi sintetični plazmid, ki je kodiral monoklonsko protitelo proti CTLA-4 (zaviralec imunskega odziva). En sam odmerek tega plazmida je induciral izražanje protitelesa več mesecev. Poleg tega so opazili, da je zdravljenje s takšno DMAb povzročilo regresijo tumorja.		Konstruirali so tudi sintetični plazmid, ki je kodiral monoklonsko protitelo proti CTLA-4 (zaviralec imunskega odziva). En sam odmerek tega plazmida je induciral izražanje protitelesa več mesecev. Poleg tega so opazili, da je zdravljenje s takšno DMAb povzročilo regresijo tumorja.

Zala.kramar: /* Oblikovanje plazmidov */

2024-05-12T07:09:44Z

Oblikovanje plazmidov

← Older revision		Revision as of 07:09, 12 May 2024
Line 3:		Line 3:

	==Oblikovanje plazmidov==		==Oblikovanje plazmidov==
	Vsak plazmid mora nujno vsebovati vsaj eno območje, ki vsebuje regulatorno zaporedje in strukturni gen za protein, ki bo v celici izzval terapevtski učinek. DNA mora seveda pred tem priti v jedro, kjer poteče transkripcija, nato pa se mRNA prenese v citosol, kjer ga ribosomi prevedejo v protein. Da je vneseni plazmid čim bolj učinkovit, je pomembno, da je gostota nukleotidnih parov citozin-gvanin čim višja, saj se s tem prepiše večja količina mRNA. Poleg tega lahko dvoverižni zapis z veliko ne-metiliranimi CpG motivi (citozin-fosfat-gvanin) deluje imunostimulatorno s tem, da se veže na Toll-podoben receptor 9 (TLR9).1 TLR9 je receptor celic imunskega odziva in ima ključno vlogo pri prepoznavanju in sprožitvi odziva na bakterijsko in virusno DNA, ki vsebuje nemetilirane motive CpG. Te CpG motivi so pogosto del genoma patogenov. Ob vezavi CpG na TLR9 imunskih celic, začnejo celice izločati vnetne citokine. Ti aktivirajo prirojen imunski odziv, poleg tega pa še prilagojen imunski odziv, različne nekrotične faktorje in celice ubijalke.		Vsak plazmid mora nujno vsebovati vsaj eno območje, ki vsebuje regulatorno zaporedje in strukturni gen za protein, ki bo v celici izzval terapevtski učinek. DNA mora seveda pred tem priti v jedro, kjer poteče transkripcija, nato pa se mRNA prenese v citosol, kjer ga ribosomi prevedejo v protein. Da je vneseni plazmid čim bolj učinkovit, je pomembno, da je gostota nukleotidnih parov citozin-gvanin čim višja, saj se s tem prepiše večja količina mRNA. Poleg tega lahko dvoverižni zapis z veliko ne-metiliranimi CpG motivi (citozin-fosfat-gvanin) deluje imunostimulatorno s tem, da se veže na Toll-podoben receptor 9 (TLR9). TLR9 je receptor celic imunskega odziva in ima ključno vlogo pri prepoznavanju in sprožitvi odziva na bakterijsko in virusno DNA, ki vsebuje nemetilirane motive CpG. Te CpG motivi so pogosto del genoma patogenov. Ob vezavi CpG na TLR9 imunskih celic, začnejo celice izločati vnetne citokine. Ti aktivirajo prirojen imunski odziv, poleg tega pa še prilagojen imunski odziv, različne nekrotične faktorje in celice ubijalke.

	Če želimo z uporabo ene vrste plazmida v celici izraziti dva ali več genov, jih lahko izrazimo neodvisno - vsakega s svojim promotorjem, kot multicistronski sistem - usklajeno izražanje genov pod vplivom istega promotorja, ali s fuzijskim proteinom - oba gena povezuje linkerska sekvenca.		Če želimo z uporabo ene vrste plazmida v celici izraziti dva ali več genov, jih lahko izrazimo neodvisno - vsakega s svojim promotorjem, kot multicistronski sistem - usklajeno izražanje genov pod vplivom istega promotorja, ali s fuzijskim proteinom - oba gena povezuje linkerska sekvenca.

Zala.kramar: /* Promotor gena za receptor s tirozin kinazno domeno 2 (Erb-B2) */

2024-05-12T07:07:51Z

Promotor gena za receptor s tirozin kinazno domeno 2 (Erb-B2)

← Older revision		Revision as of 07:07, 12 May 2024
Line 22:		Line 22:

	===Promotor gena za receptor s tirozin kinazno domeno 2 (Erb-B2)===		===Promotor gena za receptor s tirozin kinazno domeno 2 (Erb-B2)===
	Značilen je za približno četrtino primerov raka na dojki, pojavlja pa se tudi pri nekaterih drugih oblikah raka. Njegovo povečano delovanje se izrazi z zvišanjem števila tirozin kinaznih receptorjev ter ~~posledični hitrejši proliferaciji~~ celic. Plazmid s tem promotorjem so uporabili v raziskavah prav v povezavi z rakom na dojki. Za promotor so vstavili gen za citozin deaminazo (z deaminacijo citozin pretvori v uracil), ki izhaja iz E. coli. Plazmid so injicirali neposredno v tumor, s tem pa so posredno aktivirali predzdravilo fluorocitozin, ki se lahko uporabi kot substrat za citozin deaminazo. Fluorocitozin so že pred tem injicirali v celice, da se je vgradil v tumorsko DNA. Citozin deaminaza ga kljub temu lahko prepozna in pretvori v fluorouracil. To vodi do mutacije v zgradbi DNA in napak pri replikaciji ter nastanka nefunkcionalnih proteinov, ki so sicer ključni za preživetje rakavih celic. Isti promotor so uporabili tudi v raziskavi, kjer je bila pod njegovim nadzorom timidinska kinaza virusa Herpes simplex-a. S tem je ganciklovir, zdravilo, ki se uporablja za zdravljenje okužb z virusi Herpes in je bilo že predhodno vnešeno v organizem, postalo citotoksično za rakave celice s tovrstnim promotorjem, rast tumorja pa se je zaustavila.		Značilen je za približno četrtino primerov raka na dojki, pojavlja pa se tudi pri nekaterih drugih oblikah raka. Njegovo povečano delovanje se izrazi z zvišanjem števila tirozin kinaznih receptorjev ter posledično hitrejšo proliferacijo celic. Plazmid s tem promotorjem so uporabili v raziskavah prav v povezavi z rakom na dojki. Za promotor so vstavili gen za citozin deaminazo (z deaminacijo citozin pretvori v uracil), ki izhaja iz E. coli. Plazmid so injicirali neposredno v tumor, s tem pa so posredno aktivirali predzdravilo fluorocitozin, ki se lahko uporabi kot substrat za citozin deaminazo. Fluorocitozin so že pred tem injicirali v celice, da se je vgradil v tumorsko DNA. Citozin deaminaza ga kljub temu lahko prepozna in pretvori v fluorouracil. To vodi do mutacije v zgradbi DNA in napak pri replikaciji ter nastanka nefunkcionalnih proteinov, ki so sicer ključni za preživetje rakavih celic. Isti promotor so uporabili tudi v raziskavi, kjer je bila pod njegovim nadzorom timidinska kinaza virusa Herpes simplex-a. S tem je ganciklovir, zdravilo, ki se uporablja za zdravljenje okužb z virusi Herpes in je bilo že predhodno vnešeno v organizem, postalo citotoksično za rakave celice s tovrstnim promotorjem, rast tumorja pa se je zaustavila.

	===Promotor tiroidnega transkripcijskega faktorja 1===		===Promotor tiroidnega transkripcijskega faktorja 1===
	Majhno, ampak konstantno izražanje tega promotorja najdemo tudi v zdravih pljučnih celicah, v večji meri pa se izraža pri pljučnem raku. Uporabili so ga kot promotor zapisa za miR-7 (mikroRNA-7) , ki deluje kot močan tumorski supresor tako, da se veže na mRNA in zaustavi translacijo. Injicirali so ga na od tumorja nekoliko bolj oddaljeno mesto, saj so s tem povečali možnosti uničenja potencialnih metastaznih celic, ob tem pa so opazili takojšnjo zmanjšano rast tumorja.		Majhno, ampak konstantno izražanje tega promotorja najdemo tudi v zdravih pljučnih celicah, v večji meri pa se izraža pri pljučnem raku. Uporabili so ga kot promotor zapisa za miR-7 (mikroRNA-7) , ki deluje kot močan tumorski supresor tako, da se veže na mRNA in zaustavi translacijo. Injicirali so ga na od tumorja nekoliko bolj oddaljeno mesto, saj so s tem povečali možnosti uničenja potencialnih metastaznih celic, ob tem pa so opazili takojšnjo zmanjšano rast tumorja.

Zala.kramar: /* Promotor gena BIRC5 */

2024-05-12T06:43:50Z

Promotor gena BIRC5

← Older revision		Revision as of 06:43, 12 May 2024
Line 19:		Line 19:
	===Promotor gena BIRC5===		===Promotor gena BIRC5===
	Ta gen je aktiven v mnogih rakavih tkivih, v zdravih pa ne. Nosi zapis za apoptozni inhibitor survivin, ki je izredno pomemben za razvoj raka.		Ta gen je aktiven v mnogih rakavih tkivih, v zdravih pa ne. Nosi zapis za apoptozni inhibitor survivin, ki je izredno pomemben za razvoj raka.
	Promotor tega gena je bil že uporabljen v kombinaciji s hTERT, torej v obliki hibridnega promotorja. ~~Uporaba takšnega promotorja~~ se je odrazila v povečani transkiripcji genov, katerih prepisovanje je bilo regulirano s hibridnim promotorjem, in sicer timidne kinaze virusa Herpes simplex1 in mišjega granulocit-makrofag kolonijskega faktorja. ~~Tudi~~ v ~~tem primeru~~ so opazili upad v rasti tumorja.		Promotor tega gena je bil že uporabljen v kombinaciji s hTERT, torej v obliki hibridnega promotorja. Njegova uporaba se je odrazila v povečani transkiripcji genov, katerih prepisovanje je bilo regulirano s hibridnim promotorjem, in sicer timidne kinaze virusa Herpes simplex1 in mišjega granulocit-makrofag kolonijskega faktorja. Timidna kinaza pri tem deluje kot marker, ki ga celice imunskega odziva prepoznajo in zato uničijo celico, ki imajo izražen ta protein. Mišji granulocit-makrofag kolonijski faktor pa deluje imuno stimulatorno in tako ojača odziv imunskega sistema v tumorskem okolju. V obeh primerih so opazili upad v rasti tumorja.

	===Promotor gena za receptor s tirozin kinazno domeno 2 (Erb-B2)===		===Promotor gena za receptor s tirozin kinazno domeno 2 (Erb-B2)===
	Značilen je za približno četrtino primerov raka na dojki, pojavlja pa se tudi pri nekaterih drugih oblikah raka. Njegovo povečano delovanje se izrazi z zvišanjem števila tirozin kinaznih receptorjev ter posledični hitrejši proliferaciji celic. Plazmid s tem promotorjem so uporabili v raziskavah prav v povezavi z rakom na dojki. Za promotor so vstavili gen za citozin deaminazo (z deaminacijo citozin pretvori v uracil), ki izhaja iz E. coli. Plazmid so injicirali neposredno v tumor, s tem pa so posredno aktivirali predzdravilo fluorocitozin, ki se lahko uporabi kot substrat za citozin deaminazo. Fluorocitozin so že pred tem injicirali v celice, da se je vgradil v tumorsko DNA. Citozin deaminaza ga kljub temu lahko prepozna in pretvori v fluorouracil. To vodi do mutacije v zgradbi DNA in napak pri replikaciji ter nastanka nefunkcionalnih proteinov, ki so sicer ključni za preživetje rakavih celic. Isti promotor so uporabili tudi v raziskavi, kjer je bila pod njegovim nadzorom timidinska kinaza virusa Herpes simplex-a. S tem je ganciklovir, zdravilo, ki se uporablja za zdravljenje okužb z virusi Herpes in je bilo že predhodno vnešeno v organizem, postalo citotoksično za rakave celice s tovrstnim promotorjem, rast tumorja pa se je zaustavila.		Značilen je za približno četrtino primerov raka na dojki, pojavlja pa se tudi pri nekaterih drugih oblikah raka. Njegovo povečano delovanje se izrazi z zvišanjem števila tirozin kinaznih receptorjev ter posledični hitrejši proliferaciji celic. Plazmid s tem promotorjem so uporabili v raziskavah prav v povezavi z rakom na dojki. Za promotor so vstavili gen za citozin deaminazo (z deaminacijo citozin pretvori v uracil), ki izhaja iz E. coli. Plazmid so injicirali neposredno v tumor, s tem pa so posredno aktivirali predzdravilo fluorocitozin, ki se lahko uporabi kot substrat za citozin deaminazo. Fluorocitozin so že pred tem injicirali v celice, da se je vgradil v tumorsko DNA. Citozin deaminaza ga kljub temu lahko prepozna in pretvori v fluorouracil. To vodi do mutacije v zgradbi DNA in napak pri replikaciji ter nastanka nefunkcionalnih proteinov, ki so sicer ključni za preživetje rakavih celic. Isti promotor so uporabili tudi v raziskavi, kjer je bila pod njegovim nadzorom timidinska kinaza virusa Herpes simplex-a. S tem je ganciklovir, zdravilo, ki se uporablja za zdravljenje okužb z virusi Herpes in je bilo že predhodno vnešeno v organizem, postalo citotoksično za rakave celice s tovrstnim promotorjem, rast tumorja pa se je zaustavila.

Zala.kramar: /* Viri */

2024-05-12T06:31:14Z

Viri

← Older revision		Revision as of 06:31, 12 May 2024
Line 55:		Line 55:

	4. Hall RS, Fedorov AA, Xu C, Fedorov EV, Almo SC, Raushel FM. The Three-Dimensional Structure and Catalytic Mechanism of Cytosine Deaminase. Biochemistry. 2011;50(22):5077-5085. doi:10.1021/bi200483k		4. Hall RS, Fedorov AA, Xu C, Fedorov EV, Almo SC, Raushel FM. The Three-Dimensional Structure and Catalytic Mechanism of Cytosine Deaminase. Biochemistry. 2011;50(22):5077-5085. doi:10.1021/bi200483k

			5. Kaj delamo. Accessed May 12, 2024. https://www.onko-i.si/dejavnosti/raziskovalna_in_izobrazevalna_dejavnost/oddelek_za_eksperimentalno_onkologijo/kaj_delamo


	[[Category:SEM]] [[Category:BMB]]		[[Category:SEM]] [[Category:BMB]]

Zala.kramar: /* Viri */

2024-05-11T21:49:25Z

Viri

← Older revision		Revision as of 21:49, 11 May 2024
Line 49:		Line 49:
	==Viri==		==Viri==
	1. Martínez-Puente DH, Pérez-Trujillo JJ, Zavala-Flores LM, et al. Plasmid DNA for Therapeutic Applications in Cancer. Pharmaceutics. 2022;14(9):1861. doi:10.3390/pharmaceutics14091861		1. Martínez-Puente DH, Pérez-Trujillo JJ, Zavala-Flores LM, et al. Plasmid DNA for Therapeutic Applications in Cancer. Pharmaceutics. 2022;14(9):1861. doi:10.3390/pharmaceutics14091861

	2. Markovic M, Ben-Shabat S, Dahan A. Prodrugs for Improved Drug Delivery: Lessons Learned from Recently Developed and Marketed Products. Pharmaceutics. 2020;12(11):1031. doi:10.3390/pharmaceutics12111031		2. Markovic M, Ben-Shabat S, Dahan A. Prodrugs for Improved Drug Delivery: Lessons Learned from Recently Developed and Marketed Products. Pharmaceutics. 2020;12(11):1031. doi:10.3390/pharmaceutics12111031

	3. Hanagata N. Structure-dependent immunostimulatory effect of CpG oligodeoxynucleotides and their delivery system. Int J Nanomedicine. 2012;7:2181-2195. doi:10.2147/IJN.S30197		3. Hanagata N. Structure-dependent immunostimulatory effect of CpG oligodeoxynucleotides and their delivery system. Int J Nanomedicine. 2012;7:2181-2195. doi:10.2147/IJN.S30197

	4. Hall RS, Fedorov AA, Xu C, Fedorov EV, Almo SC, Raushel FM. The Three-Dimensional Structure and Catalytic Mechanism of Cytosine Deaminase. Biochemistry. 2011;50(22):5077-5085. doi:10.1021/bi200483k		4. Hall RS, Fedorov AA, Xu C, Fedorov EV, Almo SC, Raushel FM. The Three-Dimensional Structure and Catalytic Mechanism of Cytosine Deaminase. Biochemistry. 2011;50(22):5077-5085. doi:10.1021/bi200483k


	[[Category:SEM]] [[Category:BMB]]		[[Category:SEM]] [[Category:BMB]]

Zala.kramar: /* Viri */

2024-05-11T21:48:57Z

Viri

← Older revision		Revision as of 21:48, 11 May 2024
Line 48:		Line 48:

	==Viri==		==Viri==
			1. Martínez-Puente DH, Pérez-Trujillo JJ, Zavala-Flores LM, et al. Plasmid DNA for Therapeutic Applications in Cancer. Pharmaceutics. 2022;14(9):1861. doi:10.3390/pharmaceutics14091861
			2. Markovic M, Ben-Shabat S, Dahan A. Prodrugs for Improved Drug Delivery: Lessons Learned from Recently Developed and Marketed Products. Pharmaceutics. 2020;12(11):1031. doi:10.3390/pharmaceutics12111031
			3. Hanagata N. Structure-dependent immunostimulatory effect of CpG oligodeoxynucleotides and their delivery system. Int J Nanomedicine. 2012;7:2181-2195. doi:10.2147/IJN.S30197
			4. Hall RS, Fedorov AA, Xu C, Fedorov EV, Almo SC, Raushel FM. The Three-Dimensional Structure and Catalytic Mechanism of Cytosine Deaminase. Biochemistry. 2011;50(22):5077-5085. doi:10.1021/bi200483k


	[[Category:SEM]] [[Category:BMB]]		[[Category:SEM]] [[Category:BMB]]

Zala.kramar: /* Proizvodnja protiteles */

2024-05-11T21:42:47Z

Proizvodnja protiteles

← Older revision		Revision as of 21:42, 11 May 2024
Line 29:		Line 29:

	==Proizvodnja protiteles==		==Proizvodnja protiteles==
			Monoklonska protitelesa, zapisana na vektorski DNA (DMAb) vse pogosteje uporabljajo za zdravljenje raka. Pri tem uporabljajo sintetične plazmide, ki zapisujejo gene DMAb in tako omogočajo hitro sintezo takšnih protiteles. Največja prednost pri tem je preprost proces proizvodnje takšnih plazmidov in njihov skokovit razvoj predvsem v zadnjih letih.
			===Primeri===
			Miši, ki so bile okužene s človeškimi celicami raka dojke, ki so na membrani imele tirozin kinazne receptorje (Erb-B-2), so zdravili s plazmidom, ki je kodiral anti-ErbB-2 DMAb. Rezultat takega zdravljenja je bil konstantno izražanje protiteles, ki so se vezala na Erb-B-2 in povzročila uničenje tumorskih celic. Protitumorski učinek je bil enak skoraj štirim odmerkom intravenoznega injiciranega protitelesa Herceptin, zaviralca Erb-B2 receptorja, terapevtski učinek pa je bil dolgotrajnejši.
			Podobno študijo so izvedli tudi pri raku prostate, z uporabo plazmida, ki je kodiral monoklonsko protitelo proti prostati specifičnemu membranskemu antigenu (PSMA). Opazili so nadzorovano rast tumorja in preživetje miši, ki so bile zdravljene s tem plazmidom. Ta protitumorski učinek lahko poteka preko citotoksičnosti, odvisne od protiteles, tako da protitelesa sprožijo aktivnost naravnih celic ubijalk.
			Konstruirali so tudi sintetični plazmid, ki je kodiral monoklonsko protitelo proti CTLA-4 (zaviralec imunskega odziva). En sam odmerek tega plazmida je induciral izražanje protitelesa več mesecev. Poleg tega so opazili, da je zdravljenje s takšno DMAb povzročilo regresijo tumorja.

	==Vnos plazmidov v celice==		==Vnos plazmidov v celice==
	Plazmidi, ki se uporabljajo za gensko zdravljenje, se običajno vnesejo neposredno v bližino tumorjev, kjer lahko delujejo na rakave celice. Lahko se jih vnese skozi sluznico, kjer prisotnost APC izboljša učinkovitost vnesenih plazmidov, ali z intramuskularnimi, intradermalnimi ali intratumoralnimi injekcijami za tarčno delovanje na rakave celice.		Plazmidi, ki se uporabljajo za gensko zdravljenje, se običajno vnesejo neposredno v bližino tumorjev, kjer lahko delujejo na rakave celice. Lahko se jih vnese skozi sluznico, kjer prisotnost APC izboljša učinkovitost vnesenih plazmidov, ali z intramuskularnimi, intradermalnimi ali intratumoralnimi injekcijami za tarčno delovanje na rakave celice.

Zala.kramar: /* Vnos plazmidov v celice */

2024-05-11T21:38:10Z

Vnos plazmidov v celice

← Older revision		Revision as of 21:38, 11 May 2024
Line 30:		Line 30:
	==Proizvodnja protiteles==		==Proizvodnja protiteles==
	==Vnos plazmidov v celice==		==Vnos plazmidov v celice==
			Plazmidi, ki se uporabljajo za gensko zdravljenje, se običajno vnesejo neposredno v bližino tumorjev, kjer lahko delujejo na rakave celice. Lahko se jih vnese skozi sluznico, kjer prisotnost APC izboljša učinkovitost vnesenih plazmidov, ali z intramuskularnimi, intradermalnimi ali intratumoralnimi injekcijami za tarčno delovanje na rakave celice.
			Plazmide lahko v celice vnesemo z injiciranje ‘gole’ DNA, elektroporacijo, genskimi pištolami s pomočjo različnih nanodelcev ali v kompleksih z liposomi.

			Najpreprostejša oblika vnosa plazmidov je z injiciranjem ‘gole’ DNA, ki naj bi učinkovala v približno polovici primerov. Za izboljšanje imunogenosti takega cepiva, je bilo predlagano injiciranje plazmidne DNA v bezgavke, kjer so poročali o 100-krat večji imunogenosti, kar je povzročilo močnejši imunski odziv (to so testirali na mišjem modelu raka).

			Ena od najučinkovitejših metod vnosa plazmidne DNA je z elektroporacijo. Pri elektroporaciji z uporabo električnih impulzov povzročijo nastanek majhnih por na membrani, skozi katere lahko plazmidna DNA vstopi v celice. Tako kot pri injiciranju 'gole' plazmidne DNA v bližino tumorjev, tudi elektroporacijo izvajajo intratumorsko. V že opravljenih raziskavah, so poročali o lokalni migraciji APC, ki jo je povzročila elektroporacija, kar je omogočilo boljši odziv na zdravljenje.

			Biolistika je alternativna tehnika vnosa novih genskih informacij v celice. Plazmidno DNA vnesejo z gensko pištolo. Ta deluje tako, da mikroskopske delce zlata, velikosti 1 do 4 µm, prekrite s terapevtskim DNA, z gensko pištolo izstrelijo z visoko hitrostjo proti rakavim celicam s pomočjo bata, ki deluje na stisnjen plin (npr. helij). V preteklih letih so primerjali tudi vnos plazmidne DNA z gensko puško z in brez zlatih delcev. Ta raziskava je pokazala učinkovit vnos DNA brez nosilca, njena prednost pa je bila odsotnost kožnih opeklin v primerjavi s konvencionalno tehniko ter zmanjšanje stroškov zdravljenja, saj ni bilo potrebno uporabiti zlatih delcev.

			Lipofekcija je metoda vnosa genskega materiala v celice s pomočjo liposomov. To so lipidni vezikli, ki obdajajo notranje hidrofilne prostore, kamor se vgradi DNA. Liposomski kompleksi v celice vstopijo z endocitozo. Nastali endosom po vstopu v citoplazmo lahko razpade, plazmidna DNA pa se sprosti v citosol. Prednosti liposomskih kompleksov so manjša toksičnost, stabilnost kompleksov in izboljšana celična absorpcija. Zaradi negativnega naboja DNA in membrane pri fizioloških pogojih, se DNA največkrat kompleksira s kationskimi liposomi, kar izniči odboj med DNA in celično membrano ter tako omogoča sprejem kompleksa v celico. V različnih raziskavah so opazili spremenljivo učinkovitost vnešene plazmidne DNA z liposomskimi kompleksi v primerjavi z injiciranjem ‘gole’ plazmidne DNA.

	==Viri==		==Viri==


	[[Category:SEM]] [[Category:BMB]]		[[Category:SEM]] [[Category:BMB]]

Zala.kramar: /* Tumor specifični promotorji */

2024-05-11T21:32:44Z

Tumor specifični promotorji

← Older revision		Revision as of 21:32, 11 May 2024
Line 13:		Line 13:

	==Tumor specifični promotorji==		==Tumor specifični promotorji==
			Tako kot obstajajo specifični promotorji za različne zdrave celice in tkiva, so tudi za rakava tkiva značilni specifični promotorji, ki jih najdemo le v tumorskih celicah. Te promotorji so lahko vrstno specifični in jih najdemo le v omejenem tipu rakavih celic, ali pa so bolj splošni in jih najdemo v rakavih celicah različnih tkiv. To dejstvo lahko izkoristimo in plazmide skonstruiramo tako, da gene, ki jih želimo izraziti zgolj v tumorjih, damo pod kontrolo takšnih specifičnih promotorjev.
	===Promotor človeške telomerazne reverzne transkriptaze - hTERT===		===Promotor človeške telomerazne reverzne transkriptaze - hTERT===
			V zdravih telesnih celicah ta promotor ni metiliranin in omogoča vezavo represorja, kar preprečuje njegovo aktivnost. V tumorskih celicah pa pride do metilacije in posledičnega izražanja telomeraze, ki podaljšuje telomere in omogoča nesmrtnost rakavih celic.
			hTERT so v raziskavah že uporabili kot promotor, ki nadzoruje ne-metastazni klon 23, izoform H1 gen - gen , ki preprečuje metastaziranje in s tem preprečili širjenje tumorja v okoliška tkiva. Uporabili so ga tudi kot promotor gena za citotoksičen peptid. Ta se je posledično izrazil samo v rakavih celicah in zaustavil njihovo nenadzorovano proliferacijo.
	===Promotor gena BIRC5===		===Promotor gena BIRC5===
			Ta gen je aktiven v mnogih rakavih tkivih, v zdravih pa ne. Nosi zapis za apoptozni inhibitor survivin, ki je izredno pomemben za razvoj raka.
			Promotor tega gena je bil že uporabljen v kombinaciji s hTERT, torej v obliki hibridnega promotorja. Uporaba takšnega promotorja se je odrazila v povečani transkiripcji genov, katerih prepisovanje je bilo regulirano s hibridnim promotorjem, in sicer timidne kinaze virusa Herpes simplex1 in mišjega granulocit-makrofag kolonijskega faktorja. Tudi v tem primeru so opazili upad v rasti tumorja.
	===Promotor gena za receptor s tirozin kinazno domeno 2 (Erb-B2)===		===Promotor gena za receptor s tirozin kinazno domeno 2 (Erb-B2)===
			Značilen je za približno četrtino primerov raka na dojki, pojavlja pa se tudi pri nekaterih drugih oblikah raka. Njegovo povečano delovanje se izrazi z zvišanjem števila tirozin kinaznih receptorjev ter posledični hitrejši proliferaciji celic. Plazmid s tem promotorjem so uporabili v raziskavah prav v povezavi z rakom na dojki. Za promotor so vstavili gen za citozin deaminazo (z deaminacijo citozin pretvori v uracil), ki izhaja iz E. coli. Plazmid so injicirali neposredno v tumor, s tem pa so posredno aktivirali predzdravilo fluorocitozin, ki se lahko uporabi kot substrat za citozin deaminazo. Fluorocitozin so že pred tem injicirali v celice, da se je vgradil v tumorsko DNA. Citozin deaminaza ga kljub temu lahko prepozna in pretvori v fluorouracil. To vodi do mutacije v zgradbi DNA in napak pri replikaciji ter nastanka nefunkcionalnih proteinov, ki so sicer ključni za preživetje rakavih celic. Isti promotor so uporabili tudi v raziskavi, kjer je bila pod njegovim nadzorom timidinska kinaza virusa Herpes simplex-a. S tem je ganciklovir, zdravilo, ki se uporablja za zdravljenje okužb z virusi Herpes in je bilo že predhodno vnešeno v organizem, postalo citotoksično za rakave celice s tovrstnim promotorjem, rast tumorja pa se je zaustavila.
	===Promotor tiroidnega transkripcijskega faktorja 1===		===Promotor tiroidnega transkripcijskega faktorja 1===
	===Promotor za prostato ~~specifičen antigen~~===		Majhno, ampak konstantno izražanje tega promotorja najdemo tudi v zdravih pljučnih celicah, v večji meri pa se izraža pri pljučnem raku. Uporabili so ga kot promotor zapisa za miR-7 (mikroRNA-7) , ki deluje kot močan tumorski supresor tako, da se veže na mRNA in zaustavi translacijo. Injicirali so ga na od tumorja nekoliko bolj oddaljeno mesto, saj so s tem povečali možnosti uničenja potencialnih metastaznih celic, ob tem pa so opazili takojšnjo zmanjšano rast tumorja.
			===Promotor za prostato specifičnega antigena===
			Izražanje tega antigena v zdravem tkivu prostate je tako nizko, da je praktično zanemarljivo, veliko pogosteje pa ga najdemo v metastaznem raku prostate. Aktivnost tega promotorja lahko nadzorujejo DNA-vezavni proteini, sama regulacija pa je lahko odvisna od androgenov, moških spolnih hormonov.
			V primeru ene izmed raziskav so pod kontrolo tega promotorja v plazmid vstavili gen za perforin, ki naredi pore v celični membrani. Perforin je poškodoval membrane tumorskih celic in opaženo je bilo zmanjšanje tumorja, pri tem pa se zdravo tkivo ni skrčilo.

	==Proizvodnja protiteles==		==Proizvodnja protiteles==
	==Vnos plazmidov v celice==		==Vnos plazmidov v celice==