Dinamično uravnavanje (regulacija) metabolnih poti

Celični metabolizem je kompleksen splet procesov, ki jih celica medsebojno dinamično uravnava glede na trenutne razmere v in izven celice. Človek je v prvih poskusih inženiringa metabolnih poti uporabljal statične metode uravnavanja. Kljub temu, da so manj precizne se nanje še vedno zanašamo zaradi lažje izvedbe in predvidljivosti izida. <ref name="ref1">Cress, B. F., Trantas, E. A., Ververidis, F., Linhardt, R. J. & Koffas, M. A. Sensitive cells: enabling tools for static and dynamic control of microbial metabolic pathways. Curr. Opin. Biotechnol. 36, 205–214 (2015)</ref>

Statično in dinamično uravnavanje metabolizma

Statični način uravnavanja obsega urejanje genoma (insercije ali delecije), regulacijo transkripcije s transkripcijskimi faktorji in malimi nekodirajočimi RNA in regulacijo translacije in posttranslacijskih modifikacij. Tudi sistemi z možnostjo indukcije se smatrajo za statični sistem. Vsem je skupno, da vnaprej določimo parametre, ki uravnavajo metabolno pot, in jih prilagajamo na podlagi empiričnih meritev.<ref name="ref1">Cress, B. F., Trantas, E. A., Ververidis, F., Linhardt, R. J. & Koffas, M. A. Sensitive cells: enabling tools for static and dynamic control of microbial metabolic pathways. Curr. Opin. Biotechnol. 36, 205–214 (2015)</ref>

Kljub temu, da s statično manipulacijo metabolnih poti lahko uspešno dosežemo povečano izražanje iskane biološke spojine, vendar predstavlja dinamično uravnavanje v določenih primerih bistveno prednost. Nemalokrat ima določen metabolit neugoden vpliv na celico: povratno inhibicijo, je toksičen ali zavira rast celic. Dinamičen sistem se preko biološkega senzorja odzove na spremembo v celici in vpliva na prilagoditev v smeri zastavljenega cilja. Dinamični nadzor metabolne poti je genetsko zapisan sistem, ki se avtomatsko in dinamično odziva na koncentracije specifičnih znotrajceličnih metabolitov.<ref name="ref1">Cress, B. F., Trantas, E. A., Ververidis, F., Linhardt, R. J. & Koffas, M. A. Sensitive cells: enabling tools for static and dynamic control of microbial metabolic pathways. Curr. Opin. Biotechnol. 36, 205–214 (2015)</ref>

Raziskave v preteklih letih so omogočile bolj zapleteno statično uravnavanje metabolnih poti s sintezno prilagojenimi regulatorji, metabolni inženiring pa je naredil prve korake v smeri dinamičnega uravnavanja metabolnih poti. Obe temi podrobno obravnava pregledni članek Cress et al.2015, medtem ko se ta stran osredotoča na dinamične pristope. <ref name="ref1">Cress, B. F., Trantas, E. A., Ververidis, F., Linhardt, R. J. & Koffas, M. A. Sensitive cells: enabling tools for static and dynamic control of microbial metabolic pathways. Curr. Opin. Biotechnol. 36, 205–214 (2015)</ref>

Dinamični kontrolni sistemi

Dinamični kontrolni sistemi so zelo koristni v primerih, kjer je določen metabolit toksičen za celico ali pa tekmuje z drugimi celičnimi komponentami pri pomembni celični funkciji. Potrebno je skrbno načrtovanje sistema z ozirom na hitrost produkcije metabolita in koncentracijo pri kateri se njegova škodljivost bistveno poveča.<ref name="ref1">Cress, B. F., Trantas, E. A., Ververidis, F., Linhardt, R. J. & Koffas, M. A. Sensitive cells: enabling tools for static and dynamic control of microbial metabolic pathways. Curr. Opin. Biotechnol. 36, 205–214 (2015)</ref>

Dinamični kontrolni sistemi za uspešen nadzor metabolne poti zahtevajo:

1. biosenzor, ki zazna koncentracijo molekule ali okoljskega dejavnika, ki nas zanima
2. prenos te informacije neposredno na aktuator (alosterična konformacijska sprememba ali sprememba interakcije med proteinoma – asociacija ali disociacija)
3. aktuator, pretvornik, ki sprejme signal in v odgovor prilagodi koncentracijo spojine, ki jo zaznavamo (njena razgradnja ali vpliv na izražanje gena)

Prvi val dinamičnih kontrolnih sistemov

Tesno regulirana metabolna pot zahteva ustrezen pristop. Alosterična regulacija ali razgradnja encima sta učinkoviti naravni poti povratne regulacije, vendar trenutno razumevanje mehanizmov določanja specifičnosti še ni kos nalogi zasnovati sintezen specifičen alosterični regulator. Obstajajo pa naravni transkripcijski faktorji, ki se odzivajo na ligand (ligand – responsive transcription factor, LRTF) in jih s skrbnim načrtovanjem lahko uporabimo za povečanje izkoraistka naravnih metabolnih poti.<ref name="ref1">Cress, B. F., Trantas, E. A., Ververidis, F., Linhardt, R. J. & Koffas, M. A. Sensitive cells: enabling tools for static and dynamic control of microbial metabolic pathways. Curr. Opin. Biotechnol. 36, 205–214 (2015)</ref>

LRTF vsebujejo domeno za vezavo metabolita (MBD) in DNA vezavno domeno (DBD). Ob vezavi metabolita pride do alosterične spremembe konformacije DNA vezavne domene. Glede na to, da ali ima v novi konformaciji LRTF večjo ali manjšo afiniteto do operatorske regije zavre ali sproži transkripcijo.<ref name="ref1">Cress, B. F., Trantas, E. A., Ververidis, F., Linhardt, R. J. & Koffas, M. A. Sensitive cells: enabling tools for static and dynamic control of microbial metabolic pathways. Curr. Opin. Biotechnol. 36, 205–214 (2015)</ref>

Pogosto LRTF vplivajo na več kot en gen – ko omogočijo transkripcijo enega gena tudi inhibirajo izražanje gena z nasprotnim učinkom. To nadvse zaželjeno lastnost so s pridom uporabili v nekaterih primerih uravnavanja metabolne poti, ki so predstavljeniv nadaljevanju.<ref name="ref1">Cress, B. F., Trantas, E. A., Ververidis, F., Linhardt, R. J. & Koffas, M. A. Sensitive cells: enabling tools for static and dynamic control of microbial metabolic pathways. Curr. Opin. Biotechnol. 36, 205–214 (2015)</ref>

Obeti na področju dinamičnega uravnavanja metabolnih poti

Skupna točka vseh dinamično reguliranih poti so transkripcijski faktorji, ki se odzivajo na ligande (LTFR). Zankrat je njihova uporaba omejena na naravne V prihodnosti bodo raziskovalci na podlagi naravnih LRTF in informacij v bazah poskušali določiti regije odgovorne za prenos alosteričnega signala med metabolit in DNA vezavno domeno.

Viri

<references/>