PiRNA v boju za zaščito genoma

Uvod

Pri živalskih zarodnih celicah zaščitni mehanizem pred škodljivimi učinki transpozonov predstavljajo PIWI proteini in piRNA. piRNA je RNA, ki interagira s PIWI proteini in je ena od treh ohranjenih malih utiševalnih RNA v evkariontih; drugi dve sta še siRNA (mala interferenčna RNA) in miRNA (mikro RNA). Skupaj s PIWI proteini je odgovorna za preprečevanje premikanja transpozicijskih elementov (transpozonov) v zarodnih celicah in posledično varovanje stabilnosti genoma zarodne linije. PIWI-piRNA kompleksi delujejo na dveh ravneh. Prva raven je prepoznavanje traspozonov in njihovo epigenetsko utišanje, druga raven pa je prepoznavanje transkriptov transpozonov in njihova razgradnja.

Primarna piRNA

Biogeneza primarne piRNA se začne s prepisovanjem genomskih regij imenovanih piRNA gruče. Tako nastane prekurzorska pi-RNA, ki se transportira v citoplazmo do površine mitohondrijev in zarodnih granul, kjer se procesira. Endonukleaza Zucchini/PLD6 (ZUC), tam cepi prekurzorsko pi-RNA na manjše 5’ monofosforilirane fragmente. Te se naložijo na PIWI proteine in z njimi tvorijo pre-piRNA komplekse, ki se procesirajo še na 3’ koncu (z ZUC) in tvorijo zrel PIWI-piRNA kompleks. Ta gre lahko nazaj v jedro in prepozna tarčna zaporedja transpozonov s komplementarnim parjenjem baz. Nato omogoči vezavo kofaktorjev (histonske in DNA metiltransferaze), ki utišajo prepoznane transpozone.

ZUC/PLD6 nukleaza je zasidrana v zunanjo membrano mitohondrija, njena RNA vezavna katalitična domena pa je obrnjena proti citoplazmi. Ima veliko strukturno in funkcijsko ohranjenost. Njeno vezavno mesto za substrat pa je specifično, veže lahko namreč le enojno verigo nukleotidov in ne dvojne.

Primarne piRNA imajo kot zadnjo bazo na 5’ koncu večinoma uracil, kar je posledica dveh procesov. Prvi je procesiranje piRNA, kjer ZUC procesorski kompleks preferenčno cepi na fragmente, ki imajo na 5’ koncu pirimidinsko bazo. Drugi je vezava na PIWI proteine, kjer citozin tvori manj ugodne interakcije zaradi steričnega oviranja pri vezavi v žep proteina, zato je favoriziran uracil. Podobno tudi na 3’ koncu.

Sekundarna piRNA in ping pong amplifikacija

PIWI-piRNA kompleksi pa lahko po nastanku ostanejo tudi v citoplazmi in sprožijo post-transkripcijsko utišanje genov z razgradnjo tarčne RNA. Cepitev tarčnih RNA povzroči nastanek 5’ monofosforiliranih fragmentov, ki se lahko ali naprej razgradijo z eksonukleazami, ali pa se naložijo na PIWI proteine in tvorijo sekundarno piRNA.

PIWI proteini so piRNA vodene nukleaze, ki cepijo tarčno RNA med desetim in enajstim nukleotidom glede na piRNA in tako izvajajo post-translacijsko utišanje v citoplazmi. Da se na njih vežejo fragmenti sekundarne piRNA pa je potrebna specifična RNA helikaza imenovana Vasa/DDX4, proces pa je nadziran s Tudor proteini. Ta proces se lahko ponavlja, saj novonastali piRNA-PIWI kompleksi lahko, tako kot primarni, ustvarjajo novo sekundarno piRNA. Taki amplifikaciji piRNA rečemo ping-pong cikel.

Poznamo heterotipični in homotipični ping-pong cikel. Primer heterotipičnega najdemo v jajčnikih vinske mušice, kjer kompleksi Aub–piRNA (Aubergine-piRNA) z rezanjem ustvarijo fragmente, ki se naložijo na Ago3 (Argonaute-3) in obratno. Za začetek cikla pa je potreben Aubergine, saj se lahko primarna piRNA veže le nanj, ne more pa se vezati na Ago3. Pri homotipičnem ping-pong ciklu pa namesto dveh PIWI proteinov nastopa le eden. Najdemo ga v miših, kjer je vanj udeležen PIWIL2 (PIWI like protein 2).

Viri

Z. Loubalova, P. Konstantinidou, A. D. Haase: Themes and variations on piRNA-guided transposon control. Mob DNA 2023, 14, 10. DOI: 10.1186/s13100-023-00298-2

Transpozoni - Wiki FKKT. https://wiki.fkkt.uni-lj.si/index.php/Transpozoni (pridobljeno 18. apr. 2026).

Germ Cell – Sasaki Lab. https://sasaki-lab.org/research/germ-cell/ (pridobljeno 18. apr. 2026).

E. Voronina, G. Seydoux, P. Sassone-Corsi, I. Nagamori: RNA Granules in Germ Cells. Cold Spring Harb Perspect Biol 2011, 3, a002774. DOI: 10.1101/cshperspect.a002774